检测项目
1.形态学鉴定:体长(1.8-2.5mm)、鞘翅斑纹(放射状条纹间距0.05-0.12mm)、前胸背板宽度比(1:1.3)
2.分子生物学检测:COI基因序列(658bp)、ITS2区段特异性引物(F:5'-CCTACAGGAGCCTTG-3')
3.卵形态分析:卵粒直径(0.30.02mm)、卵壳纹饰(六边形网格密度≥20个/mm)
4.危害特征验证:取食斑直径(0.5-1.2mm)、叶脉残留率(≤15%)
5.抗药性监测:乙酰胆碱酯酶活性抑制率(LC50≥200mg/L)、解毒酶GSTs活性(≥35nmol/min/mg)
检测范围
1.甘薯田间植株叶片样本(鲜样含水率≥75%)
2.仓储期甘薯块根表面附着虫体
3.跨境种苗检疫样本(枝条直径≥5mm)
4.土壤越冬蛹体(土层深度5-15cm)
5.农用器械表面残留虫卵(放大倍率40可识别)
检测方法
1.ISO21772:2018《植物检疫昆虫形态鉴定规范》第Ⅲ类鞘翅目鉴定程序
2.GB/T35343-2017《进出境种苗有害生物检测规程》第7.2条龟甲科检测要求
3.ASTME3069-19《植物害虫分子鉴定标准指南》COI基因扩增方案
4.NY/T3088-2017《甘薯病虫害田间调查技术规范》第4级危害评估标准
5.SN/T1306-2019《进出境植物检疫抽样方法》棋盘式取样法
检测设备
1.LeicaM205C体视显微镜(20-160连续变倍,LED环形冷光源)
2.ThermoFisherQuantStudio5实时荧光定量PCR仪(96孔快速升降温系统)
3.OlympusBX53生物显微镜(1000油镜,微分干涉对比功能)
4.SartoriusCP225D电子分析天平(0.01mg精度,防震称量室)
5.EppendorfCentrifuge5430R高速冷冻离心机(15000rpm,温控范围-20℃~40℃)
6.BOXCUNBXC-25L人工气候箱(光照强度0-30000lux可调)
7.Agilent4200TapeStation系统(DNA/RNA完整性数值化评估)
8.ZeissAxioCamERc5s显微数码相机(500万像素,实时图像测量模块)
9.LabconcoCentriVap真空浓缩仪(同时处理121.5mL样品)
10.HIRAYAMAHVE-50高压灭菌锅(135℃/0.22MPa生物安全级灭菌)