检测项目

1.毒力基因簇分析:VFs(VirulenceFactors)、PAIs(PathogenicityIslands)全基因组扫描

2.毒素蛋白表达量测定:ELISA定量分析肠毒素/溶血素/神经毒素等

3.生物膜形成能力测试:结晶紫染色法测定OD570值

4.抗生素敏感性试验:MIC值测定(CLSIM100标准)

5.宿主细胞侵袭实验:HeLa/Macrophage细胞系侵袭率统计

检测范围

1.临床分离菌株:金黄色葡萄球菌、肺炎克雷伯菌等耐药菌株

2.疫苗生产用减毒株:脊髓灰质炎病毒疫苗株、卡介苗BCG等

3.食品污染微生物:单增李斯特菌、沙门氏菌等食源性致病菌

4.农业病原体:稻瘟病菌、柑橘黄龙病病原体等植物致病微生物

5.环境微生物样本:水体/土壤中军团菌、铜绿假单胞菌等

检测方法

1.全基因组测序:ISO/IEC17025:2017标准下的IlluminaNovaSeq6000平台

2.实时荧光定量PCR:GB/T27403-2008规范执行毒力基因qPCR验证

3.蛋白质印迹分析:参照GB/T34797-2017进行毒力蛋白WesternBlot检测

4.动物模型验证:ASTMF2459-05(2020)标准小鼠感染模型建立

5.生物信息学分析:采用VFDB数据库(http://www.mgc.ac.cn/VFs/)进行毒力基因注释

检测设备

1.实时荧光定量PCR仪:ABIQuantStudio7Pro(动态范围1-10^10拷贝)

2.全自动微生物鉴定系统:VITEK2Compact(可鉴定500+菌种)

3.超高效液相色谱仪:WatersACQUITYUPLCH-Class(毒素分离精度0.1ng/mL)

4.激光共聚焦显微镜:LeicaTCSSP8(生物膜三维重构分析)

5.高通量测序平台:IlluminaNovaSeq6000(PE150测序模式)

6.流式细胞仪:BDFACSCelesta(宿主细胞感染率多参数分析)

7.全自动酶标仪:TecanInfiniteM200Pro(OD值测量精度0.001)

8.生物安全柜:ESCOAirstreamClassIIB2(HEPAH14级过滤)