检测项目
1.KRT5/KRT14基因全外显子测序:覆盖基因编码区及剪切位点20bp区域
2.透射电镜超微结构分析:观察基底细胞角蛋白中间丝网络完整性(分辨率≤0.2nm)
3.免疫荧光染色检测:角蛋白5/14单克隆抗体标记(激发波长488nm/发射波长520nm)
4.皮肤力学测试:测量表皮剥离阈值(0-50N量程,精度0.1N)
5.蛋白质印迹分析:定量角蛋白表达水平(SDS-PAGE分离胶浓度8-12%)
检测范围
1.新生儿皮肤活检组织(直径≥3mm全层皮肤样本)
2.EDTA抗凝外周血样本(采集量≥5ml)
3.口腔黏膜脱落细胞(专用细胞刷采集)
4.羊水细胞培养物(孕16-20周取样)
5.石蜡包埋病理切片(厚度4-5μm)
检测方法
1.Sanger测序法(ISO15189:2012医学实验室质量要求)
2.二代测序技术(Illumina平台TruSeqNanoDNA建库方案)
3.透射电镜制样法(ISO21348:2007生物样本超薄切片制备规范)
4.免疫组化染色法(GB/T37862-2019免疫组织化学试剂盒性能评价标准)
5.蛋白质印迹法(GB/T34819-2017蛋白质免疫印迹法通则)
检测设备
1.IlluminaNovaSeq6000测序仪(通量6Tb/run,读长2150bp)
2.FEITecnaiG2Spirit透射电镜(加速电压120kV,配备EagleCCD相机)
3.LeicaCM1950冰冻切片机(切片精度1μm,温控范围-50℃至0℃)
4.Bio-RadChemiDocMP成像系统(动态范围4ordersofmagnitude)
5.Agilent2100生物分析仪(DNA/RNA完整性指数评估)
6.ThermoFisherQuantStudio7实时PCR仪(支持384孔板反应体系)
7.ZeissAxioImager.M2荧光显微镜(配置63油镜及DAPI/FITC/TRITC滤光片组)
8.MettlerToledoXP205分析天平(量程220g,精度0.01mg)
9.EppendorfCentrifuge5430R高速离心机(最大转速30,000rpm)
10.MiltenyiBiotecGentleMACS组织解离仪(程序化机械解离方案)