检测项目
1.线粒体膜电位测定(ΔΨm):采用JC-1荧光探针法检测膜电位变化(单位:mV)
2.ATP合成酶活性分析:测定复合物V催化活性(单位:μmol/min/mg蛋白)
3.超氧化物歧化酶(SOD)活性:黄嘌呤氧化酶法测定(单位:U/mg蛋白)
4.线粒体DNA拷贝数定量:SYBRGreen实时荧光定量PCR检测(单位:拷贝数/细胞)
5.活性氧(ROS)水平监测:DCFH-DA荧光探针法测定(单位:荧光强度/10^4细胞)
检测范围
1.哺乳动物细胞培养液中的线粒体提取物
2.植物原生质体分离样本(如拟南芥叶肉原生质体)
3.临床活检组织线粒体悬液(心肌/肝组织)
4.模式生物线粒体样本(果蝇/斑马鱼胚胎)
5.工业微生物发酵菌体的原生质体制备物
检测方法
1.差速离心法分离线粒体(GB/T35809-2018)
2.MTT比色法测定细胞活力(ISO10993-5:2009)
3.WesternBlotting检测细胞色素C释放(ASTMF2906-12)
4.流式细胞术分析膜通透性(GB/T39730-2020)
5.透射电镜观察线粒体超微结构(ISO21363:2020)
检测设备
1.BeckmanCoulterOptimaXPN-80超速离心机:实现梯度密度分离(最大转速80,000rpm)
2.AgilentSeahorseXFe96细胞能量代谢分析仪:实时监测耗氧率(OCR)和胞外酸化率(ECAR)
3.OlympusIX83倒置荧光显微镜:配备FRET模块进行共定位分析
4.MalvernZetasizerNanoZSP动态光散射仪:测定原生质体粒径分布(0.3nm-10μm)
5.ThermoScientificMultiskanSkyHigh酶标仪:支持6种以上波长同步检测
6.BDFACSAriaIII流式细胞分选仪:配置405/488/640nm三激光系统
7.JEOLJEM-1400Flash透射电子显微镜:分辨率0.38nm@25kV
8.EppendorfBioSpectrometerbasic核酸蛋白分析仪:波长范围190-830nm
9.PerkinElmerLambda365紫外分光光度计:带宽0.5-5nm可调
10.SartoriusCubisII微量天平:最小读数0.1μg(量程2.1g)