检测项目
1.形态学特征:体长3.5-4.2mm;前翅半透明具褐色横带;头冠前缘具黑色叉状突;后足胫节端距排列式1+4+4
2.DNA条形码检测:COI基因序列比对(658bp),与NCBI数据库相似度≥98%
3.卵形态分析:长径0.8-1.0mm,短径0.3-0.4mm;卵壳表面六边形网格纹
4.寄主选择性测试:葡萄属植物取食偏好性(Vitisvinifera/V.labrusca)
5.传播能力验证:植原体16SrV组特异性引物fP1/rP7扩增(1250bp)
检测范围
1.农林检疫:葡萄苗木及接穗材料
2.昆虫标本:鞘翅目叶蝉科成虫/若虫标本
3.土壤样本:越冬卵筛查(0-20cm土层)
4.植物病理材料:植原体侵染的葡萄叶片
5.跨境货物:木质包装材料表面虫卵附着检测
检测方法
1.ISO21571:2005分子生物学检测规范
2.GB/T31746-2015植物检疫昆虫标本制备规程
3.ASTME1752-08昆虫DNA提取标准方法
4.GB/T35342-2017植原体实时荧光PCR检测
5.OEPPPM7/129(1)褐带叉突叶蝉诊断协议
检测设备
1.奥林巴斯SZX16体视显微镜(10-110连续变倍):形态特征观察
2.ThermoFisherQuantStudio5实时荧光定量PCR仪:靶标基因扩增
3.LeicaEMCPD300临界点干燥仪:标本脱水处理
4.BioTekSynergyH1酶标仪:核酸浓度测定(260/280nm波长)
5.ZeissAxioImagerA2微分干涉显微镜:卵壳超微结构分析
6.EppendorfCentrifuge5430R高速冷冻离心机(30,000g):DNA提取
7.MemmertIPP110培养箱(251℃,RH70%):若虫饲养观察
8.Agilent4200TapeStation系统:DNA完整性检测
9.KeyenceVHX-7000数码显微系统:三维形态测量
10.MiltenyiBiotecGentleMACS组织匀浆仪:昆虫组织破碎