检测项目

1.ATP2A2基因全外显子测序：覆盖SERCA2蛋白编码区（NM_170665.3）全部21个外显子
2.皮肤组织病理学检查：观察角化不良细胞（corpsronds）、陷窝形成（lacunae）等特征性改变
3.透射电镜超微结构分析：分辨率≤0.2nm，观察张力丝-桥粒复合体异常
4.钙离子转运功能测定：采用Fluo-4AM荧光探针（λex=494nm,λem=516nm）
5.角质形成细胞培养：培养基钙浓度梯度设置（0.05-1.5mM）
6.免疫组化染色：抗Desmoplakin抗体（克隆号DP/02）染色强度定量分析

检测范围

1.皮肤活检标本：厚度4mm穿刺样本或手术切除样本
2.EDTA抗凝全血：采集量≥5mL（DNA提取浓度≥50ng/μL）
3.口腔黏膜刮片：采用无菌刮匙采集颊黏膜上皮细胞
4.永生化角质细胞系：经EB病毒转化建立的患者原代细胞模型
5.石蜡包埋组织切片：切片厚度4μm（HE染色及特殊染色）
6.冷冻保存组织样本：液氮速冻后-80℃长期保存

检测方法

1.Sanger测序法（GB/T30988-2014）：ABI3500xL测序仪进行双向验证
2.二代测序技术（ISO/IEC17025:2017）：IlluminaNovaSeq6000平台PE150模式
3.HE染色技术（GB/T36137-2018）：LeicaST5020自动染色机标准化操作
4.免疫荧光定量（ASTME2533-17）：NikonA1R共聚焦显微镜定量分析
5.Westernblot检测（ISO13485:2016）：Bio-RadChemiDocMP成像系统
6.钙成像技术（ISO10993-22:2017）：OlympusIX83活细胞工作站动态监测

检测设备

1.IlluminaNovaSeq6000测序系统：通量20Breads/run，支持全外显子组测序
2.LeicaEMUC7超薄切片机：切片厚度10-100nm（电镜样本制备）
3.FEITecnaiG2Spirit透射电镜：加速电压120kV，配备EagleCCD相机
4.Agilent2100生物分析仪：DNA/RNA完整性指数（RIN≥7.0）质控
5.ThermoFisherQuantStudio7Pro实时PCR仪：HRM分析SNP位点
6.ZeissAxioImager.M2病理分析