检测项目

1.虫卵形态学鉴定:采用光学显微镜(400-1000)观察样本中虫卵形态特征(直径30-47μm),测量卵壳厚度(0.5-1.0μm)及六钩蚴结构。

2.成虫DNA测序:针对线粒体cox1基因(引物Hym-F:5'-ATGGCCTTTTCTGTAGGTGA-3';Hym-R:5'-TAAAGAAAGAACATAATGAAAATG-3')进行PCR扩增及序列比对。

3.血清IgG抗体ELISA检测:使用重组Hn-STK抗原包被板(浓度≥2μg/mL),临界值OD450≥0.42判为阳性。

4.粪便抗原胶体金试纸条检测:捕获抗体为抗H.nana排泄分泌抗原单克隆抗体(克隆号Hn-ES7),灵敏度≥95%

5.病理组织切片染色:石蜡切片厚度4μm,HE染色观察头节吸盘小钩数量(20-30个)及排列特征。

检测范围

1.人类及啮齿类动物粪便样本(保存温度4℃/24h或-20℃/长期)

2.谷物类食品(小麦、玉米等)中虫卵污染筛查(取样量≥200g)

3.饮用水及地表水样(过滤膜孔径0.45μm)

4.实验动物(小鼠、大鼠)肠道组织标本

5.食品加工器械表面生物膜样本(棉拭子采集面积10cm)

检测方法

ISO18744:2016《微生物学-食品链微生物学-寄生虫检验的总体要求》

GB/T23838-2009《贝类中肠道寄生虫检验方法》

WS/T635-2018《粪便检验规程》附录B绦虫卵检查法

SN/T2778-2011《国境口岸短膜壳绦虫病监测规程》

ASTME2888-19《StandardGuideforLaboratoryIdentificationofParasites》

检测设备

1.OlympusCX43生物显微镜:配备DP27数码相机及cellSens软件(虫卵形态分析)

2.Bio-RadT100PCR仪:支持梯度PCR(退火温度52℃-58℃优化)

3.ThermoMultiskanFC酶标仪:波长范围340-850nm(ELISA定量分析)

4.MilliporeSigma密理博真空抽滤系统(SX0004700):配套47mm滤膜支架

5.LeicaRM2235轮转式切片机:切片精度1μm(病理标本制备)

6.EppendorfCentrifuge5430R:最大转速15,300g(粪便样本预处理)

7.QiagenQIAampDNAStoolMiniKit:DNA提取效率≥90%

8.ShimadzuUV-2600i分光光度计:核酸浓度测定(A260/A280比值1.7-2.0)