检测项目

1.病原菌分离培养：使用PDA培养基（马铃薯葡萄糖琼脂），培养温度251℃，湿度85%5%，观察菌丝生长速率及孢子囊形态

2.分子生物学鉴定：ITS序列扩增（引物ITS1/ITS4），PCR产物测序比对NCBI数据库

3.生理生化特性：淀粉水解试验（0.2%可溶性淀粉）、纤维素酶活性（DNS法测定还原糖含量）

4.致病性验证：离体接种试验（接种浓度110⁶孢子/mL），病斑直径测量（精度0.01mm）

5.抗药性检测：甲霜灵敏感性测试（EC50值测定），浓度梯度0-100μg/mL

检测范围

1.马铃薯块茎（SolanumtuberosumL.）及其加工制品

2.甘薯块根（IpomoeabatatasLam.）种植土壤及种苗

3.木薯加工原料（ManihotesculentaCrantz）仓储样品

4.药用植物块根（包括黄芪、甘草等）干燥制品

5.观赏植物块茎（如大丽花、仙客来）繁殖材料

检测方法

ISO16140-3:2022《分子生物学方法验证规范》用于PCR扩增流程验证

GB/T28068-2011《植物病原菌分离培养技术规程》规范菌株纯化操作

ASTME3060-16《实时荧光定量PCR检测植物病原体标准指南》指导定量分析

GB/T3543.5-1995《农作物种子检验规程真实性鉴定》用于种苗带菌率测定

ISO21527-2:2008《真菌毒素检测方法》参照进行次生代谢产物分析

检测设备

1.Bio-RadT100ThermalCycler：用于ITS基因片段PCR扩增程序控制

2.OlympusBX53荧光显微镜：配备DP80双摄像头系统（400显微观察孢子囊结构）

3.ThermoScientificHerathermIGS60恒温培养箱：温度控制精度0.3℃，湿度波动≤5%RH

4.Agilent2100生物分析仪：DNA完整性检测（灵敏度达0.1ng/μL）

5.SartoriusCP225D电子天平：称量精度0.01mg（培养基配制专用）

6.EppendorfCentrifuge5430R：最大转速15,000rpm（菌体快速离心收集）

7.MemmertHPP750恒温恒湿箱：温控范围0-70℃（病样预处理设备）

8.ThermoNanoDropOne紫外分光光度计：核酸浓度测定（波长260/280nm）

9.LeicaCM1950冷冻切片机：样本超薄切片（厚度精度1μm）

10.ShimadzuGCMS-QP2020NX：挥发性代谢产物分析（质量范围m/z10-1100）