检测项目

1.形态学鉴定:测量成虫体长(5.3-6.1mm)、前翅脉序特征(R脉分叉角度322)、胫节色斑面积占比(≥85%)

2.线粒体COI基因序列分析:目标片段长度658bp,比对率≥99%判定为阳性

3.植原体携带检测:16SrRNA基因扩增(引物P1/P7),退火温度52℃0.5℃

4.寄主植物关联性测试:刺吸行为持续时长≥120s/24h判定为有效传播媒介

5.抗药性监测:LC50值测定(吡虫啉≤0.12mg/L为敏感种群)

检测范围

1.葡萄属(Vitisspp.)苗木及接穗

2.进出口鲜食葡萄果品(含水率≤15%)

3.农林生态系统土壤样本(深度0-30cm)

4.木质包装材料(ISPM15标准适用)

5.实验室保藏昆虫标本(乙醇浓度≥75%)

检测方法

1.ISO21571:2005分子生物学检测通则

2.GB/T28084-2011植物检疫昆虫标本制备规程

3.EPPOPM7/129(1)植原体实时荧光PCR检测法

4.ASTME1752-17昆虫抗药性生物测定标准指南

5.GB/T35348-2017进境葡萄繁殖材料检疫规程

检测设备

1.OlympusBX53生物显微镜:配备DP27成像系统(分辨率20481536)

2.Bio-RadT100ThermalCycler:温控精度0.1℃

3.Agilent4200TapeStation系统:DNA完整性指数(DIN≥7)测定

4.EppendorfCentrifuge5424R:最大转速15,300rpm(RCF21,130g)

5.LeicaEMCPD300临界点干燥仪:压力范围0-150bar(CO2介质)

6.ThermoScientificMultiskanSkyHigh酶标仪:吸光度测量精度1%

7.SartoriusCP225D电子天平:称量精度0.01mg(最大量程220g)

8.MemmertIPP110培养箱:温度均匀性0.3℃(20-60℃范围)