检测项目

1.GAA酶活性测定：采用荧光底物4-MUG法（正常参考值≥2.0nmol/mg蛋白/h）

2.G6PC基因全外显子测序：覆盖NM_000151.4全部5个外显子及剪切位点

3.肝组织糖原定量：双波长法测定（正常值≤5%湿重）

4.肌酸激酶同工酶MB（CK-MB）测定：化学发光法（成人参考区间0-25U/L）

5.血乳酸动态监测：酶电极法（空腹正常值0.5-2.2mmol/L）

6.尿四糖检测：LC-MS/MS法（检出限0.1μmol/L）

检测范围

1.全血样本：EDTA抗凝全血用于GAA酶活性初筛及DNA提取

2.肌肉活检组织：开放活检获取≥50mg标本用于组织化学染色

3.肝穿刺样本：超声引导下获取20mg肝组织进行糖原定量

4.干血斑（DBS）：Whatman903滤纸采集用于新生儿筛查

5.成纤维细胞培养：皮肤活检标本建立细胞系进行酶学复核

6.羊水细胞：孕16-20周采集用于产前诊断

检测方法

1.酶活性测定：依据CLSIEP05-A3建立室内质控体系

2.基因测序：遵循ACMG变异解读指南（PMID:25741868）

3.组织病理学：参照WHO软组织肿瘤分类标准（2020版）

4.生化分析：执行ISO15197对血糖监测系统的验证要求

5.质谱检测：采用FDA认证的NewbornScreeningQualityAssuranceProgram

6.免疫印迹：按照GB/T30934-2014蛋白质印迹法通则操作

检测设备

1.ThermoFisherQuantStudio5实时荧光定量PCR仪：用于GAA基因拷贝数分析

2.WatersXevoTQ-S微升液相色谱串联质谱仪：尿四糖定量检测

3.BeckmanAU5800全自动生化分析仪：完成CK-MB、乳酸等生化指标测定

4.LeicaCM1950冰冻切片机：制备8μm厚肝/肌肉组织切片

5.IlluminaNovaSeq6000测序平台：开展全外显子组测序

6.PerkinElmerEnVision多标记微孔板检测仪：执行4-MUG荧光底物读数

7.SiemensADVIACentaurXP化学发光免疫分析仪：胰岛素样生长因子测定

8.EppendorfMastercyclerX50梯度PCR仪：完成目标片段扩增

9.ABI3500xLDx基因分析仪：Sanger测序验证二代测序结果

10.OlympusBX53荧光显微镜：观察PAS染色糖原沉积特征