检测项目

1.病原菌分离培养：采用PDA培养基（马铃薯葡萄糖琼脂），培养温度251℃，湿度85%，观察菌落形态及分生孢子特征

2.毒素含量测定：定量检测交链孢酚（AOH）、交链孢霉烯（AME）等毒素，HPLC法检出限0.01mg/kg

3.分子生物学鉴定：基于ITS-rDNA序列分析（引物ITS1/ITS4），PCR扩增产物长度500-600bp

4.孢子浓度测定：血球计数板法测定孢子悬浮液浓度（≥10^4CFU/mL）

5.致病性试验：离体叶片接种法（孢子悬浮液浓度110^5spores/mL），温湿度控制28℃/RH90%

检测范围

1.茄科作物：马铃薯块茎黑斑病（Alternariasolani）

2.十字花科蔬菜：甘蓝叶斑病（Alternariabrassicicola）

3.水果类：苹果果实轮纹病（Alternariamali）

4.种子样本：大豆种皮带菌率检测（Alternariaalternata）

5.土壤基质：耕作层（0-20cm）链格孢菌孢子负荷量测定

检测方法

1.ISO16140-3:2021微生物学方法验证规范（分子生物学鉴定）

2.GB/T36839-2018农作物种子带菌率检测技术规程

3.ASTMD8083-16植物病原真菌毒素HPLC检测标准

4.NY/T401-2000农药残留分析样本制备通则（毒素提取）

5.ISO21527-2:2008食品中真菌孢子计数方法（血球计数板法）

检测设备

1.PCR扩增仪（Bio-RadT100）：ITS基因片段扩增程序：94℃预变性5min→35循环（94℃/30s,55℃/30s,72℃/1min）→72℃延伸10min

2.高效液相色谱仪（Agilent1260InfinityII）：C18色谱柱（4.6250mm,5μm），流动相甲醇-水梯度洗脱（0.8mL/min）

3.全自动菌落计数仪（InterscienceScan500）：分辨率4800dpi，菌落直径测量精度0.1mm

4.恒温恒湿培养箱（BINDERKBW240）：温度控制精度0.5℃，湿度波动范围3%RH

5.荧光显微镜（OlympusBX53）：配备DP80双摄像头系统（400-1000观察分生孢子链形态）

6.超净工作台（ESCOAirstreamACB-4E）：垂直层流风速0.45m/s10%，HEPA过滤效率99.99%

7.冷冻离心机（Eppendorf5430R）：最大转速30,000rpm，温控范围-20℃至40℃

8.生物安全柜（NuAireNU-437-400E）：二级生物安全防护等级，进风风速0.53m/s10%

9.超低温冰箱（ThermoScientificTSX70086A）：温度范围-86℃3℃，样本保存容量700L

10.电泳成像系统（Bio-RadGelDoc™XR+）：紫外透射波长302nm，图像分辨率6.5百万像素