检测项目
1.孢子形态分析:测量冬孢子/夏孢子的长度(18-32μm)、宽度(12-20μm)、壁厚(1.5-3μm)及表面纹饰特征
2.孢子密度测定:采用血球计数板法检测单位面积孢子数量(≥500个/mm为高风险)
3.寄主植物鉴定:通过ITS序列比对确认寄主特异性(rDNA-ITS区域扩增引物ITS1/ITS4)
4.病原菌分离培养:在PDA培养基中观察菌落形态(生长速率≤2mm/d)、产孢结构及温度适应性(15-28℃)
5.抗药性测试:测定三唑类药剂EC50值(戊唑醇>0.8μg/mL提示耐药性)
检测范围
1.松科植物组织样本:包括马尾松、油松等针叶树种的新鲜病枝
2.农作物种子检疫:玉米、小麦等禾本科作物携带的越冬孢子
3.观赏植物栽培基质:月季、蔷薇等蔷薇科植物的根际土壤样本
4.木材及木制品:原木、板材的截面切片(厚度5-10μm)
5.进出口农产品:按ISPMNo.31标准要求的检疫对象
检测方法
1.ISO17075-2:2017《植物病害诊断-分子生物学方法》
2.GB/T35337-2017《林木病原菌分离培养技术规程》
3.ASTME1758-95(2021)《显微镜法测定真菌孢子尺寸》
4.GB15569-2009《农业植物检疫实验室技术要求》
5.ISO7214:2020《植物病原真菌抗药性测定指南》
检测设备
1.OlympusBX53研究级显微镜:配备DP27数码相机及cellSens软件(孢子形态测量)
2.ThermoFisherQuantStudio5实时荧光PCR仪:TaqMan探针法进行物种鉴定
3.MettlerToledoXS105分析天平:精度0.01mg的药剂称量
4.Eppendorf5430R高速冷冻离心机:最大转速30,000rpm的核酸提取
5.MemmertIPP110培养箱:温度波动0.3℃的病原菌培养
6.LeicaCM1950冰冻切片机:制备20μm厚度的木材样本切片
7.NIKONSMZ25体视显微镜:16:1变倍比观察病斑表面结构
8.EscoAirstreamClassII生物安全柜:达到NSF49标准的无菌操作
9.SartoriusMillipore纯水系统:产水电阻率18.2MΩcm的分子实验用水
10.BOXUNBIC-400人工气候箱:光强3000lux可调的寄主接种试验