检测项目

1.抗VII型胶原IgG抗体定量检测（ELISA法）：临界值≥20U/mL为阳性

2.皮肤间接免疫荧光分析：盐裂皮肤模型IgG沉积定位（真皮侧阳性）

3.COL7A1基因全外显子测序：覆盖NM_000094.4转录本54个外显子

4.透射电镜超微结构观察：锚定纤维密度≤5根/μm为异常

5.免疫印迹法VII型胶原蛋白表达量：正常对照值≥80%

6.炎症因子谱分析（IL-6/TNF-α/IFN-γ）：化学发光法阈值≤15pg/mL

检测范围

1.血清样本（采集量≥3mLEDTA抗凝血）

2.皮肤活检组织（直径≥4mm冷冻切片样本）

3.口腔黏膜拭子（DNA提取浓度≥50ng/μL）

4.石蜡包埋病理切片（厚度3-5μm）

5.细胞培养上清液（原代角质形成细胞传代≤P3）

6.基因测序文库（插入片段200-300bp）

检测方法

1.免疫荧光法：ISO15189:2012医学实验室质量体系

2.Sanger测序：GB/T30990-2014核酸测序技术导则

3.WesternBlot：GB/T27417-2017蛋白质印迹法通则

4.ELISA定量：ASTME3060-16酶联免疫吸附试验标准指南

5.NGS测序：ISO/IEC17025:2017高通量测序验证规范

6.电镜观察：GB/T27761-2011生物样品扫描电镜制备规程

检测设备

1.LeicaCM1950冰冻切片机（组织切片厚度精度1μm）

2.Bio-RadChemiDocMP成像系统（化学发光灵敏度0.5pg）

3.ThermoFisherQuantStudio7Pro实时PCR仪（温控精度0.1℃）

4.HitachiHT7800透射电镜（分辨率0.2nm）

5.IlluminaNovaSeq6000测序平台（单次通量6Tb）

6.OlympusBX63荧光显微镜（405/488/561/640nm四色激光）

7.BeckmanCoulterAU5800生化分析仪（检测速度2000测试/小时）

8.Agilent2100生物分析仪（DNA/RNA完整性指数评估）

9.EppendorfCentrifuge5430R（最大RCF30,130g）

10.MiltenyiBiotecGentleMACS组织解离仪（程序化裂解周期≤30min）