检测项目

1.病原菌形态学观察：菌丝直径（2.5-4.8μm）、分生孢子长度（18-32μm）、附着胞形成率（≥85%）

2.侵染强度测定：病斑扩展速率（0.8-2.3mm/d）、木质部褐变指数（0-4级）、叶绿素损失率（15-65%）

3.生理生化指标：过氧化物酶活性（U/mgprot12.6-45.8）、丙二醛含量（nmol/g3.8-21.4）、细胞膜透性（相对电导率25-78%）

4.分子生物学检测：β-tubulin基因扩增（引物T1/T2）、ITS序列比对（GenBank相似度≥99%）、qPCR定量（Ct值≤32）

5.抗性基因表达：PAL酶活性（U/g8.7-34.2）、PR蛋白浓度（μg/mL0.15-1.26）、NBS-LRR基因转录水平（FPKM≥5）

检测范围

1.禾本科作物：水稻叶鞘样本、小麦茎秆切片、玉米根系分泌物

2.经济林木：油茶叶片离体组织、橡胶树枝条维管束横切面

3.园艺植物：番茄果实表皮细胞、葡萄藤韧皮部提取液

4.土壤基质：根际土壤微生物群落DNA、病残体降解物悬浮液

5.种质资源：抗病品种胚芽鞘接种体、转基因植株T3代愈伤组织

检测方法

ISO21458:2018《植物病原真菌分子鉴定规范》孢子悬浮液制备法

GB/T28084-2019《植物病害诊断技术规程》显微成像系统应用指南

ASTME1755-2020《植物组织膜透性测定标准方法》电导率测定法

ISO21527-2:2021《真菌毒素检测》高效液相色谱串联质谱法

GB/T3543.5-2021《农作物种子检验规程》实时荧光定量PCR技术规范

检测设备

OlympusBX53荧光显微镜：配备DP27相机，支持400油镜观察菌丝隔膜结构

ThermoNanoDropOne超微量分光光度计：检测DNA纯度（A260/A280比值1.8-2.0）

Bio-RadT100PCR仪：支持梯度PCR程序（退火温度52-60℃可调）

Agilent1260InfinityIIHPLC系统：配备ZORBAXSB-C18色谱柱（4.6250mm）

LeicaCM1950冷冻切片机：-25℃低温环境制作10μm厚组织切片

METTLERTOLEDOSevenExcellence电导率仪：测量范围0-200mS/cm0.5%精度

IlluminaNovaSeq6000测序平台：开展全基因组重测序（PE150模式）

SartoriusQuintix224-1CN分析天平：称量精度0.1mg，符合GLP规范

EppendorfCentrifuge5430R高速离心机：最大转速15,000rpm，温控范围-10~40℃

PerkinElmerEnSpire多模式读板机：支持化学发光法检测PR蛋白表达量