检测项目

1.病原菌鉴定：基于16SrRNA基因序列比对（Vvha/Vvhb引物组），阳性检出限≤10^2CFU/mL

2.毒素基因检测：vcgC/vcgE毒力基因分型（PCR扩增效率≥95%）

3.生物负荷量测定：实时荧光定量PCR（标准曲线R≥0.998）

4.耐药性分析：CLSIM45-A3标准测试β-内酰胺酶活性（抑菌圈直径0.5mm）

5.溶血活性评估：绵羊血琼脂平板法（溶血环直径与菌落直径比值≥1.5）

检测范围

1.临床样本：创伤渗出液、血液标本（抗凝剂EDTA-K2浓度3.6mg/mL）

2.水产品：牡蛎鳃部组织（取样量≥25g）、鱼类表皮黏液（保存温度41℃）

3.环境样本：海水过滤浓缩液（0.22μm滤膜截留率＞99%）

4.食品加工环节：刀具表面拭子（采样面积1010cm）、操作台生物膜

5.生物制品：医用胶原蛋白敷料（提取液体积比1:10）

检测方法

ISO/TS21872-1:2017食品和动物饲料微生物学-副溶血性弧菌属检测

GB4789.30-2016食品安全国家标准创伤弧菌检验

ASTME2148-16水环境中致病性弧菌富集培养技术规范

CLSIM100-S31抗菌药物敏感性试验执行标准

SN/T1870-2016出口食品中致病性弧菌属多重PCR检测方法

检测设备

ThermoScientificMultiskanSkyHigh全波长酶标仪（吸光度测量精度1%）

AppliedBiosystems7500FastReal-TimePCR系统（熔解曲线分辨率0.1℃）

SartoriusIncubatorSHKE8000恒温摇床（温度均匀性0.3℃）

BioMerieuxVITEK2Compact全自动微生物鉴定系统（数据库含78种弧菌特征谱）

MilliporeSigmaMilli-QIQ7003超纯水系统（电阻率18.2MΩcm）

CytivaAKTApure25蛋白纯化系统（毒素蛋白回收率＞85%）

SysmexUF-5000尿沉渣分析仪（细胞计数CV值＜5%）

SartoriusCubisIIMSA225P-100-DA微量天平（最小称量值0.01mg）