检测项目

1.病原菌鉴定：基于ITS序列分析（扩增区域18S-28SrRNA），比对NCBI数据库确认Ustilagocynodontis

2.孢子形态分析：测量冬孢子直径（15-25μm）、表面纹饰（网状突起）、萌发率（≥85%）

3.分子检测：实时荧光PCR（引物UC-F:5'-CGTACCTGCGGGAA-3'；UC-R:5'-TTCGCTGCGTTCTT-3'）

4.抗病性评估：接种后21天病斑面积占比（分级标准0-4级）

5.环境因子分析：土壤pH值（5.5-7.0）、湿度（60-80%RH）、温度（20-28℃）关联性研究

检测范围

1.苔草属植物：中华苔草（Carexchinensis）、卵穗苔草（Carexduriuscula）活体植株

2.草坪种子：进口/国产狗牙根（Cynodondactylon）种质资源

3.土壤样本：根系层0-20cm深度带菌土样

4.草坪草皮：成品草皮（规格3040cm）病害潜伏期检测

5.病株残体：越冬病原体载量测定（孢子浓度≥10^4CFU/g）

检测方法

1.ISO21458:2018《植物病害分子检测规范》实时荧光定量PCR法

2.ASTMD7993-15《草坪病害诊断技术指南》孢子悬浮液制备标准

3.GB/T3543.5-1995《农作物种子检验规程》健康检验篇

4.NY/T1213-2006《牧草病害鉴定技术规范》显微形态学诊断

5.SN/T4283.2-2015《进境植物检疫规程》黑粉菌检疫处理标准

检测设备

1.OlympusBX53荧光显微镜：1000油镜观察孢子超微结构

2.Bio-RadT100ThermalCycler：PCR扩增（控温精度0.1℃）

3.ThermoNanoDropOne紫外分光光度计：DNA纯度检测（A260/A280≥1.8）

4.EppendorfCentrifuge5430R：孢子离心（最大转速30,000rpm）

5.MemmertICP600培养箱：病原菌培养（温度波动0.5℃）

6.SartoriusQuintix224-1CN电子天平：称量精度0.1mg

7.LeicaCM1950冷冻切片机：组织样本制备（切片厚度10μm）

8.Agilent4200TapeStation：DNA完整性检测（DV200≥60%）

9.ThermoScientificHeratherm烘箱：玻片干燥（60℃2℃）

10.METTLERTOLEDOSevenExcellencepH计：土壤酸碱度测定（分辨率0.01pH）