检测项目
1.形态特征鉴定:体长180-220μm,背板纹饰呈网状结构,足Ⅰ胫节刚毛长度7-9μm
2.虫口密度测定:单位叶面积虫瘿数量统计(≥3个/cm为重度侵染)
3.分子生物学检测:COI基因序列比对(目标片段长度658bp)
4.危害程度分级:叶片畸形率(Ⅰ级<10%,Ⅱ级10-30%,Ⅲ级>30%)
5.越冬卵存活率检测:低温处理(-20℃1℃)72h后孵化实验
检测范围
1.黄连木(Pistaciachinensis)新鲜叶片及嫩枝样本
2.受侵染植株周边50m范围内土壤样品
3.苗木调运过程中的检疫样本
4.同属寄主植物(如阿月浑子Pistaciavera)
5.虫瘿组织切片(厚度8-10μm)
检测方法
1.ISO21748:2017《植物检疫处理指南-瘿螨科》形态鉴定流程
2.GB/T35334-2017《林业有害生物监测技术规程》虫口密度测定法
3.ASTME1752-17《植物病原分子检测标准指南》DNA提取规范
4.GB/T36852-2018《进出境植物检疫抽样方法》抽样比例要求
5.ISO/IEC17025:2017《检测实验室通用技术要求》质量控制体系
检测设备
1.奥林巴斯BX53研究级显微镜(配DP27数码成像系统):400显微测量精度1μm
2.ThermoFisherQuantStudio5实时荧光定量PCR仪:支持TaqMan探针法检测
3.LeicaCM1950冷冻切片机:-30℃低温切片厚度控制精度0.5μm
4.EppendorfCentrifuge5430R高速离心机:最大转速15,000rpm
5.MettlerToledoXSR205DU分析天平:称量精度0.01mg
6.MemmertIPP110培养箱:温度控制范围0-70℃0.3℃
7.Bio-RadChemiDocMP成像系统:化学发光法核酸电泳分析
8.ZeissStemi508体视显微镜:10-50连续变倍观察虫瘿结构
9.ThermoScientificNanoDropOne超微量分光光度计:DNA纯度OD260/280比值测定
10.ESCOAC2-4S1生物安全柜:符合NSF49ClassIIA2型标准