检测项目

1.病原菌分离培养：菌落形态（直径/颜色/质地）、菌丝生长速率（mm/24h）、菌核形成特征（直径0.5-5mm）

2.生理生化指标：过氧化物酶活性（U/mgprot）、丙二醛含量（nmol/g）、细胞膜透性（相对电导率%）

3.分子生物学检测：rDNA-ITS序列分析（引物ITS1/ITS4）、β-tubulin基因扩增（引物Bt1a/Bt1b）

4.血清学检测：ELISA法测定抗原浓度（OD405≥0.3为阳性）

5.寄主抗性鉴定：病情指数（0-9级）、发病率（%）、潜育期（h）

检测范围

1.农作物种子：水稻、小麦、玉米等禾本科作物种质资源

2.土壤样本：耕作层（0-20cm）土壤菌核密度（个/g）测定

3.植株组织：根茎部病斑长度测量（≥3mm为典型症状）

4.组培苗：离体接种后褐变程度分级（0-IV级）

5.有机基质：育苗基质带菌量检测（CFU/g）

检测方法

1.ISO16140:2016微生物检测方法验证规范

2.GB/T36839-2018水稻立枯病诊断技术规程

3.ASTMD7907-14植物病原真菌分离标准指南

4.NY/T3088-2017农作物病害分子检测通用要求

5.SN/T1809-2006进出境植物病原真菌检疫鉴定方法

检测设备

1.PCR扩增仪（Bio-RadT100）：ITS基因片段扩增（94℃预变性5min）

2.全自动酶标仪（ThermoMultiskanFC）：ELISA法OD值测定（波长405nm）

3.冷冻切片机（LeicaCM1950）：病组织超薄切片制作（厚度10μm）

4.体视显微镜（OlympusSZX16）：菌核形态观察（40-100倍放大）

5.梯度PCR仪（EppendorfMastercycler）：退火温度优化（45-65℃梯度）

6.超净工作台（苏净SW-CJ-2FD）：病原菌无菌操作（洁净度ISO5级）

7.恒温培养箱（MemmertICP800）：菌株纯培养（251℃黑暗条件）

8.电泳成像系统（Tanon3500）：核酸条带分析（100-500bp判读）

9.超低温冰箱（HaierDW-86L628）：菌种保藏（-80℃甘油管保存）

10.生物安全柜（EscoAirstreamClassII）：活菌操作（风速0.38m/s20%）