检测项目
1.数均分子量(Mn)测定:测量范围1kDato2000kDa,精度±1%,用于评估平均分子大小。
2.重均分子量(Mw)测定:范围5kDato2500kDa,精度±2%,反映分子量分布的重心。
3.多分散指数(PDI)计算:PDI=Mw/Mn,值≤2.0表示分布较窄,≥2.0表示宽分布。
4.分子量分布曲线分析:通过GPC图谱获取,显示不同分子量组分的相对含量。
5.保留时间校准:使用标准葡聚糖系列,分子量1kDa,5kDa,10kDa,50kDa,100kDa,500kDa,1000kDa,2000kDa。
6.峰面积积分和定量:采用面积归一化法,RSD≤2%forreplicateinjections。
7.样品浓度测定:UV检测at280nmforproteinsorRIdetectionforcarbohydrates,浓度范围0.1-10mg/mL。
8.回收率测试:标准添加法,添加已知量标准品,回收率应在95-105%范围内。
9.重复性测试:同一样品多次测量,RSD≤3%forMnandMw。
10.极限分子量测定:使用Mark-Houwink方程,参数a和K根据多糖类型确定。
11.色谱柱效验证:理论塔板数≥5000plates/m,不对称因子0.8-1.2。
12.系统适用性测试:进样精密度RSD≤1%,保留时间RSD≤0.5%。
检测范围
1.灵芝多糖提取物:来自Ganodermalucidum,分子量范围10-100kDa,主要用于免疫调节。
2.枸杞多糖:源自Lyciumbarbarumfruits,分子量5-50kDa,具有抗氧化活性。
3.香菇多糖:从Lentinulaedodes,分子量20-200kDa,用于增强免疫力。
4.银耳多糖:Tremellafuciformis,分子量15-150kDa,常用于护肤和健康食品。
5.海藻多糖:如褐藻糖胶frombrownalgae,分子量50-500kDa,用于抗炎和抗癌研究。
6.菊粉:Inulinfromchicory,分子量1-10kDa,作为膳食纤维。
7.β-葡聚糖:从燕麦或酵母,分子量100-1000kDa,用于降低胆固醇。
8.壳聚糖:Chitosanfromchitin,分子量可变basedondeacetylationdegree,10-1000kDa。
9.果胶:Fromfruitslikeapple,分子量10-100kDa,用作胶凝剂。
10.阿拉伯半乳聚糖:Fromlarchtrees,分子量5-50kDa,用于免疫支持。
11.魔芋葡甘露聚糖:FromAmorphophalluskonjac,分子量200-2000kDa,用于减肥食品。
12.黄芪多糖:FromAstragalusmembranaceus,分子量10-80kDa,用于传统中药。
检测方法
国际标准:
ASTMD5296-19:JianCeTestMethodforMolecularWeightAveragesandMolecularWeightDistributionofPolystyrenebyHighPerformanceSize-ExclusionChromatography.Adaptedforpolysaccharides.
ISO13885-1:2021:Gelpermeationchromatography(GPC)-Part1:Tetrahydrofuran(THF)aseluent.Forsyntheticpolymers,modifiedforaqueousGPCofpolysaccharides.
ISO11292:1995:Instantcoffee-Determinationoffreeandtotalcarbohydratecontents-Methodusinghigh-performanceanion-exchangechromatography.Relevantforsomepolysaccharides.
USP<621>Chromatography:Generalchapteronchromatography,applicabletoGPC.
ICHQ2(R1):ValidationofAnalyticalProcedures:TextandMethodology.Guidesmethodvalidationformolecularweighttests.
国家标准:
GB/T22232-2008:保健食品中多糖的测定方法。IncludesmolecularweightdeterminationbyGPC.
GB/T5009.8-2016:食品中蔗糖、淀粉、乳糖、果糖、葡萄糖、麦芽糖、多糖的测定。Coversvariouscarbohydrates.
GB/T14701-2019:饲料中β-葡聚糖的测定。Forspecificpolysaccharides.
GB/T20373-2006:变性淀粉中羟丙基含量的测定。Relatedtostarchpolysaccharides.
GB/T22491-2008:大豆低聚糖。Foroligosaccharides,whicharelowmolecularweightpolysaccharides.
GB/T35818-2018:林业生物质原料分析方法:多糖的测定。Forplant-basedpolysaccharides.
检测设备
1.凝胶渗透色谱系统:型号GPC-2000,配备示差折光检测器(RI)和多角度激光光散射检测器(MALLS),分子量范围1kDato2000kDa。
2.高效液相色谱仪:型号HPLC-1000,用于多糖分离,流速精度±0.1%,压力范围0-400bar。
3.紫外-可见分光光度计:型号UV-500,波长范围190-800nm,用于浓度测定atspecificwavelengths。
4.折射率检测器:型号RI-300,灵敏度0.1μRIU,用于GPC中的浓度检测。
5.多角度激光光散射检测器:型号MALLS-800,角度15°to165°,提供绝对分子量withoutstandards。
6.自动进样器:型号AS-400,进样精度±0.5%,支持96-wellplates。
7.色谱柱:如TSKgelG4000PWxl,用于水相GPC,分离范围upto500kDa。
8.数据采集和处理软件:型号Soft-1000,用于分子量计算和分布分析,符合21CFRPart11。
9.恒温箱:型号Temp-200,控制柱温at30°Cor40°C,精度±0.1°C。
10.溶剂输送系统:型号Pump-500,流速范围0.001-10mL/min,精度±0.5%。