可送检的样品类型与对应检测项目
| 样品类型 | 典型应用场景 | 主要检测项目 | 常用方法 / 参考 |
|---|---|---|---|
| 桃育种材料（幼嫩叶片、嫩梢、休眠芽） | 杂交后代真实性核验、转基因新材料创制与群体筛选、标记辅助选育 | 外源调控元件筛查（35S启动子、NOS终止子）、标记基因检测（nptII、bar）、转化事件特异性确认 | 核酸提取纯化按GB/T 19495.3-2004，实时荧光定性PCR按GB/T 19495.4-2018，边界序列测序按GB/T 38570-2020 |
| 桃苗木、接穗与砧木（芽接苗、枝接苗、山桃/毛桃砧木） | 苗木市场流通合规核验、嫁接繁殖材料品种一致性查验 | 转基因成分定性筛查、品种真实性SSR指纹图谱 | 抽样制样按SN/T 1194-2020，SSR分子标记按NY/T 3642-2020，毛细管电泳分型 |
| 桃果实及加工制品（鲜桃、罐头、桃汁、果脯、桃胶） | 原料与加工链转基因成分溯源、标识符合性验证 | 筛查基因定性、转基因成分定量、加工品DNA降解程度评估 | 实时荧光定量PCR按GB/T 19495.5-2018，数字PCR参照SN/T 5334.1-2020 |
| 桃花粉与花器官 | 基因漂流与花粉散布规律研究、邻近果园交叉污染评估 | 转基因成分定量、基因漂移频率计算 | 微滴数字PCR绝对定量，实时荧光定量PCR标准曲线法 |
| 进境桃种植材料（芽条、砧木种子、组培材料） | 引种检疫配套检测、隔离试种材料转基因成分监管 | 转基因成分筛查、品系特异性鉴定 | 实时荧光PCR定性检验按SN/T 1204-2016，目标序列测序按GB/T 38570-2020 |
| 桃树根茎与根段组织 | 砧木一致性核查、树体更新前后材料比对 | 品种指纹图谱比对、转基因成分残留筛查 | DNA提取纯化按NY/T 674-2003，SSR分型按NY/T 3642-2020 |
检测项目
1. 外源调控元件筛查：35S启动子、NOS终止子、FMV 35S等筛查靶标组合，定性检出限0.1%（质量分数）
2. 标记基因检测：nptII、bar、pat、hpt等标记基因，实时荧光定性PCR以Ct值≤35且扩增曲线呈典型S形判阳性
3. 转基因成分定量：实时荧光定量PCR定量范围0.1%～10%，定量限0.1%，重复性条件下RSD≤25%
4. 数字PCR绝对定量：低丰度样品定量限0.01%，结果偏倚控制在±20%以内，不依赖标准曲线
5. 目标序列测序确认：外源插入载体边界序列扩增子测序，测序深度≥500×，比对一致性≥99%
6. 品种真实性SSR指纹鉴定：采用不少于20个SSR位点构建指纹图谱，毛细管电泳分型分辨率1bp
检测范围
1. 桃地方品种：肥城桃、深州蜜桃、奉化水蜜桃、炎陵黄桃、金秋红蜜等主栽品种
2. 育种新材料：胚拯救后代、高代自交系、转基因标记辅助选育群体
3. 商业繁殖体：芽接苗、枝接苗、组培苗及山桃、毛桃等常用砧木
4. 桃加工产品：糖水罐头、桃汁、果脯、冻干桃片及桃胶原料
5. 进境种植材料：隔离检疫芽条、砧木种子与脱毒组培材料
检测方法
1. GB/T 38505-2020 转基因产品通用检测方法
2. GB/T 19495.1-2004 转基因产品检测 通用要求和定义
3. GB/T 19495.3-2004 转基因产品检测 核酸提取纯化方法
4. GB/T 19495.4-2018 转基因产品检测 实时荧光定性聚合酶链式反应（PCR）检测方法
5. GB/T 19495.5-2018 转基因产品检测 实时荧光定量聚合酶链式反应（PCR）检测方法
6. GB/T 38570-2020 植物转基因成分测定 目标序列测序法
7. GB/T 35535-2017 大豆、油菜中外源基因成分的测定 膜芯片法（筛查策略参照）
8. NY/T 3642-2020 桃品种鉴定 SSR分子标记法
9. SN/T 1194-2020 植物及其产品转基因成分检测 抽样及制样方法
10. SN/T 5334.1-2020 转基因植物产品的数字PCR检测方法 第1部分：通用要求与定义
11. NY/T 674-2003 转基因植物及其产品检测 DNA提取和纯化
检测设备
1. 实时荧光定量PCR仪(96孔机型)：FAM/VIC/ROX/Cy5四通道，温控精度±0.1℃
2. 微滴式数字PCR系统：单反应体系生成2万个微滴，定量限低至0.01%
3. 芯片式数字PCR系统：一体式芯片免微滴转移，绝对计数重复性CV≤10%
4. 自动化核酸提取仪(磁珠法)：96通量，单批处理1～96个样品，洗脱体积50～100μL
5. 梯度PCR扩增仪：温控范围4～99℃，梯度温差最大24℃，控温精度±0.2℃
6. 毛细管电泳遗传分析仪：8毛细管阵列，SSR片段分型分辨率1bp
7. 超微量分光光度计：检测下限2ng/μL，评估A260/A280与A260/A230核酸纯度比值
8. 凝胶成像分析系统：UV透射与蓝光双光源，核酸条带最低检出0.1ng
9. 台式低温高速离心机：最高转速15000rpm以上，温控范围-20～40℃
10. 生物安全柜(II级A2型)：操作区洁净度ISO 5级，保障PCR前区操作洁净度