玻璃化解冻液线粒体膜电位测试

检测项目

细胞健康评估：

• 生存率检测：活细胞比例（≥85%，参照ISO 10993-5）
• 凋亡率检测：Annexin V阳性率、Caspase-3活性（偏差值±5%）

膜电位测试：

• ΔΨm值：荧光比率（JC-1红/绿≥1.5）
• 膜完整性：PI渗透率（≤10%）

代谢功能检测：

• ATP含量：相对荧光单位（RFU≥2000）
• 耗氧率：OCR变化率（±10%）

氧化应激评估：

• ROS水平：DCF荧光强度（参照ISO 21427-1）
• SOD活性：抑制率（≥70%）

冷冻耐受性：

• 复苏效率：细胞回收率（≥90%）
• 冰晶损伤评级：显微评分（G≤2级）

基因表达分析：

• 线粒体基因：mtDNA拷贝数（偏差±0.5倍）
• 凋亡相关基因：Bax/Bcl-2比率（≤1.0）

渗透压测试：

• 溶液渗透压：mOsm/kg（280-320范围）
• 细胞肿胀率：体积变化（±5%）

功能性验证：

• 增殖能力：倍增时间（≤24小时）
• 分化潜能：标记物表达率（≥80%）

生物兼容性：

• 细胞毒性：LD50值（≥100μg/mL，参照GB/T 16886.5）
• 溶血率：血红蛋白释放（≤5%）

稳定性测试：

• 解冻液保存期：活性维持（≥6个月）
• 温度敏感性：ΔΨm衰减率（≤20%/小时）

检测范围

1. 人类干细胞： 胚胎干细胞及iPSC，重点检测解冻后分化潜力维持和膜电位稳定性

2. 动物原代细胞： 肝细胞、心肌细胞，侧重冷冻耐受性和功能性恢复指标

3. 生物样本库组织： 皮肤、角膜组织，检测冻存后细胞活力和基因完整性

4. 肿瘤细胞系： HeLa、A549细胞，评估解冻液对增殖率和凋亡影响

5. 生殖细胞： 精子、卵母细胞，重点分析膜电位变化和受精能力

6. 免疫细胞： T细胞、NK细胞，检测冷冻复苏后细胞毒性和代谢活性

7. 神经细胞： 神经元、胶质细胞，侧重突触功能及ROS水平控制

8. 植物原生质体： 拟南芥、水稻细胞，评估渗透压适应和膜完整性

9. 微生物细胞： 酵母、细菌，检测复苏率及ATP代谢效率

10. 器官芯片模型： 微流体芯片培养细胞，重点验证解冻后三维结构完整性

检测方法

国际标准：

• ISO 10993-5:2009 医疗器械生物学评价-细胞毒性试验
• ISO 21427-1:2006 水质-微核试验-第1部分：体外哺乳细胞法
• ISO 20391-1:2018 细胞计数-第1部分：细胞浓度测定

国家标准：

• GB/T 16886.5-2017 医疗器械生物学评价第5部分：体外细胞毒性试验
• GB/T 39730-2020 细胞冷冻保存技术规范
• GB/T 27818-2011 化学品线粒体膜电位测定方法

（方法差异说明：国际标准ISO 10993-5采用直接接触法，而国家标准GB/T 16886.5增加提取液测试；GB/T 39730-2020针对冷冻保存要求更高温度稳定性，与ISO 20391-1细胞计数法在精度上存在±2%偏差）

检测设备

1. 流式细胞仪： BD FACSAria III（激光波长488nm/640nm，检测通道12个）

2. 荧光显微镜： Olympus IX83（物镜放大倍数40x-100x，CCD分辨率2048x2048）

3. 酶标仪： Thermo Multiskan GO（波长范围340-850nm，孔板容量384孔）

4. 细胞计数器： Countess II FL（荧光检测限0.1μm，样品容量50μL）

5. 冷冻离心机： Eppendorf 5424 R（转速范围100-15000rpm，温度控制-10°C至40°C）

6. 恒温培养箱： Memmert INCO108（温度范围5°C-50°C，CO2控制0-20%）

7. 实时PCR仪： Roche LightCycler 480（热循环速率4°C/s，检测通道6色）

8. 生物安全柜： Esco Airstream AC2-4S1（洁净等级Class II，风速0.3m/s）

9. 渗透压仪： Advanced Instruments 3320（测量范围0-2000mOsm/kg，精度±1%）

10. 超低温冰箱： Thermo Scientific Forma 900系列（温度范围-86°C，容量700L）

11. 显微成像系统： Nikon Eclipse Ti2（相机分辨率5MP，时间延迟集成）

12. 分光光度计： Shimadzu UV-2600（波长范围190-1100nm，带宽1nm）

13. 细胞培养反应器： Sartorius BIOSTAT RM（容积2L，pH控制7.0-7.4）

14. 电穿孔系统： Bio-Rad Gene Pulser Xcell（电压范围50-3000V，脉冲宽度10μs）

15. 微量加样器： Eppendorf Research plus（体积范围0.1-1000μL，精度±0.5%）

北检(北京)检测技术研究院【简称：北检院】

报告：可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。

检测周期：7~15工作日，可加急。

资质：旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。

标准测试：严格按国标/行标/企标/国际标准检测。

非标测试：支持定制化试验方案。

售后：报告终身可查，工程师1v1服务。

以上是与"玻璃化解冻液线粒体膜电位测试"相关的简单介绍，具体试验/检测周期、检测方法和仪器选择会根据具体的检测要求和标准而有所不同。北检研究院将根据客户需求合理的制定试验方案。