检测项目

形态学鉴定:

  • 成虫特征:体长测量(雌虫3.8-4.6mm,雄虫3.3-3.8mm)、前翅端斑形态(参照EPPO1/285标准)
  • 生殖器解剖:阳茎端突结构、载肛突形态(参照Asche&Wilson分类体系)
分子生物学检测:
  • DNA条形码:线粒体COI基因序列分析(扩增引物:LCO1490/HCO2198)
  • 特异性PCR:Sfur-JianCe2特异性引物扩增(扩增产物284bp)
种群密度监测:
  • 田间扫网:百网虫量计数(标准网口径40cm,30°弧摆)
  • 稻株调查:百丛若虫数量分级(轻度:≤10头/百丛)
抗药性检测:
  • 毒力测定:吡虫啉LC50值测定(稻茎浸渍法,参照IRAC022方法)
  • 酶活性分析:羧酸酯酶活性(α-NA底物,单位nmol/min/mg蛋白)
传毒能力检测:
  • 病毒携带率:RT-PCR检测水稻条纹病毒RSV(引物:RSV-CP-F/R)
  • 传毒效率:单虫传毒试验(接毒时长48h,发病率统计)
生理指标检测:
  • 飞行能力:飞行磨测试(持续飞行时间≥6h判定为强迁飞型)
  • 繁殖参数:单雌产卵量(人工饲料饲喂,温度25±1℃)
生态适应性检测:
  • 温度阈值:发育起点温度(C)计算(直线回归法)
  • 寄主选择性:趋性行为测定(Y型嗅觉仪,挥发物浓度10μl/L)
卵态检测:
  • 卵块特征:产卵痕形态(褐色条斑长度0.8-1.2mm)
  • 胚胎发育:卵黄沉积分级(参照IRRI卵期图谱)
越冬能力检测:
  • 低温存活:过冷却点测定(热电偶法,范围-15℃至-20℃)
  • 越冬基数:稻桩解剖调查(存活若虫/平方米计数)
抗性基因检测:
  • 靶标突变:乙酰胆碱受体基因AChR测序(Y151S突变位点)
  • 代谢基因表达:CYP6ER1相对表达量(qPCR,2^-ΔΔCt法)

检测范围

1.水稻植株:重点检测分蘖期至乳熟期植株中下部叶片,监测若虫密度及卵块分布

2.越冬寄主植物:再生稻、落粒稻及禾本科杂草(稗草、看麦娘等)的越冬虫态确认

3.迁飞种群监测:高空捕虫网(海拔500-1000m)收集迁飞个体,进行种群来源分析

4.进口稻种:实施种传检疫,检测卵粒及低龄若虫(参照ISPM31标准)

5.灯光诱集样本:频振式诱虫灯捕获成虫,开展雌雄比及抱卵量统计

6.天敌体内检测:蜘蛛、黑肩绿盲蝽等捕食性天敌的消化道内含物分子鉴定

7.病毒病株:条纹叶枯病株上的媒介昆虫带毒率检测

8.抗性监测点:农药施用区域种群,测定吡蚜酮等药剂LC90值变化

9.转基因水稻:Bt水稻田间种群发育进度监测(若虫历期记录)

10.气候边界区:北纬28°以北地区越冬存活率验证(土壤温度记录仪辅助)

检测方法

国际标准:

  • EPPO1/285(2)飞虱科害虫鉴定规程
  • IRAC022稻茎浸渍法抗药性检测
  • ISPM31进口种苗检疫程序
国家标准:
  • GB/T28082-2011水稻飞虱测报技术规范
  • GB/T31794-2015稻飞虱抗药性监测方法
  • SN/T1388-2019水稻条纹病毒检疫鉴定
(方法差异说明:GB/T31794规定浸渍法药液量50ml,而IRAC标准为20ml;EPPO形态鉴定要求解剖生殖器,国家标准侧重外部形态特征)

检测设备

1.体视显微镜:LeicaM205C(放大倍数8x-160x,复眼结构观察)

2.PCR扩增仪:Bio-RadT100(温控精度±0.2℃,梯度PCR功能)

3.电泳成像系统:Tanon3500R(紫外透射波长302nm,凝胶分辨率5μgDNA)

4.全自动测序仪:ABI3730xl(毛细管长度50cm,读长>900bp)

5.实时荧光定量PCR仪:RocheLightCycler480(多色检测通道,温变速率4.8℃/s)

6.超微量分光光度计:NanoDropOne(检测范围2-3700ng/μl,样本量1μl)

7.昆虫飞行磨:FL-2型(转速调节范围0.1-3.0m/s,数据采样率100Hz)

8.微注射系统:EppendorfTransferMan4m(注射精度0.1μm,病毒接种专用)

9.低温培养箱:SanyoMIR-154(温控范围-10℃至50℃,越冬模拟)

10.高速冷冻离心机:Eppendorf5425R(最大转速15,000rpm,RNA提取专用)

11.全自动酶标仪:ThermoMultiskanSky(检测波长340-850nm,酶活性测定)

12.昆虫呼吸代谢仪:SableSystemsFMS(CO2分辨率1ppm,耗氧量测定)

13.激光共聚焦显微镜:ZeissLSM900(荧光通道4个,卵黄蛋白观测)

14.便携式孢子捕捉仪:虫情测报灯TPCB-II-C(光源波长365nm,诱集半径200m)

15.智能稻飞虱计数器:图像识别型(识别准确率≥95%,计数速度10丛/分钟