检测项目

1.LYST基因全外显子测序：覆盖c.727C>T（p.Arg243Trp）、c.1091G>A（p.Cys364Tyr）等32个已知致病突变位点

2.溶酶体酸性磷酸酶活性测定：参考区间0.8-2.5nmol/min/mg蛋白（37℃）

3.中性脂质沉积量分析：采用荧光标记法测定胞内脂滴体积占比＞15%为阳性阈值

4.血小板δ颗粒密度测定：透射电镜观察颗粒密度≤3个/μm为异常

5.免疫印迹法LYST蛋白表达量：WesternBlot定量阈值＜30%正常对照判定为缺陷型

检测范围

1.全血样本：EDTA抗凝外周血（采集后6小时内处理）

2.皮肤成纤维细胞：原代培养第3-5代细胞系

3.骨髓穿刺物：瑞氏染色玻片及冻存单核细胞悬液

4.组织活检标本：肝组织冰冻切片（厚度8-10μm）

5.干血斑样本：Whatman903滤纸≥3个直径8mm血斑

检测方法

1.Sanger测序法：依据ISO15189:2012医学实验室标准进行LYST基因编码区验证

2.荧光底物法酶活性检测：参照GB/T37868-2019《溶酶体贮积症诊断指南》操作规范

3.流式细胞术颗粒分析：执行CLSIH26-A2标准（CD63抗体标记法）

4.三重四级杆质谱法：采用ISO15193:2009认证的代谢物定量方案

5.透射电镜超微结构观察：按ASTME3060-16标准制备样本及成像

检测设备

1.ThermoFisherQuantStudio5实时荧光定量PCR仪：支持高分辨率熔解曲线分析

2.IlluminaNextSeq550二代测序平台：150bp双端读长模式用于外显子组测序

3.BeckmanCoulterCytoFLEX流式细胞仪：配置488nm/640nm双激光器系统

4.HitachiHT7800透射电子显微镜：0.2nm点分辨率用于亚细胞结构观测

5.WatersXevoTQ-S微升流质谱仪：MRM模式定量分析代谢产物

6.OlympusIX83倒置荧光显微镜：配备CellSens成像分析模块

7.EppendorfMastercyclerX50梯度PCR仪：支持0.1℃温控精度程序

8.Bio-RadChemiDocMP成像系统：化学发光法蛋白定量分析平台