检测项目
1.多聚核糖体密度梯度离心分析(参数:10-50%蔗糖梯度离心,离心力200,000g)
2.核糖体亚基完整性电泳检测(参数:1.5%琼脂糖凝胶电泳,电压100V/30min)
3.mRNA-核糖体结合位点活性测定(参数:荧光标记探针杂交效率≥95%)
4.翻译延伸速率定量(参数:嘌呤霉素阻断法0.5%误差)
5.ATP依赖性解离动力学分析(参数:ATP浓度梯度0-5mM)
检测范围
1.哺乳动物细胞裂解液(HEK293、HeLa等)
2.植物组织提取液(拟南芥叶片、水稻胚乳)
3.原核生物核糖体制剂(大肠杆菌BL21菌株)
4.体外重组翻译系统(兔网织红细胞裂解液)
5.临床病理样本(肿瘤组织冰冻切片)
检测方法
1.ISO15193:2009《体外诊断系统-核酸扩增法》第7.3节多聚核糖体分离规范
2.ASTME3136-18《细胞生物学实验离心技术指南》梯度离心条款
3.GB/T37868-2019《生物样品中RNA-蛋白质复合物检测通则》
4.ISO10993-5:2009《医疗器械生物学评价》细胞活性关联测试
5.GB/T34796-2017《核酸定量检测通用要求》荧光探针法
检测设备
1.BeckmanOptimaXPN-100超速离心机(最大离心力1,050,000g)
2.Bio-RadChemiDocMP成像系统(化学发光/荧光双模式)
3.ThermoFisherNanoDropOneC紫外分光光度计(A260/A280纯度分析)
4.Agilent2100生物分析仪(核糖体完整性数值RIN≥8.0判定标准)
5.EppendorfMastercyclerX50梯度PCR仪(温度精度0.1℃)
6.GEHealthcareKTApure蛋白纯化系统(His标签亲和层析)
7.MalvernZetasizerNanoZSP动态光散射仪(粒径分布测定)
8.ABIQuantStudio6荧光定量PCR仪(SYBRGreenI熔解曲线分析)
9.LeicaTCSSP8共聚焦显微镜(FRET效率测定模块)
10.SartoriusCubisII微量天平(称量精度0.001mg)