偶联磷酸化作用检测概述:检测项目1.磷酸化位点定量分析:采用质谱法测定Ser/Thr/Tyr位点磷酸化比例(精度0.5%)2.激酶活性测定:基于放射性标记法(32P-ATP)或荧光底物法(激发波长340nm)3.ATP消耗速率监测:通过生物发光法(灵敏度0.1pmol/μL)4.磷酸转移效率计算:基于HPLC分离产物(保留时间偏差≤0.2min)5.反应体系pH依赖性测试:梯度缓冲液系统(pH6.0-8.5)检测范围1.生物样本:血清蛋白组、细胞裂解液、线粒体提取物2.重组蛋白:His标签融合激酶、GST标记底物蛋白3.药物筛选
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1.磷酸化位点定量分析:采用质谱法测定Ser/Thr/Tyr位点磷酸化比例(精度0.5%)
2.激酶活性测定:基于放射性标记法(32P-ATP)或荧光底物法(激发波长340nm)
3.ATP消耗速率监测:通过生物发光法(灵敏度0.1pmol/μL)
4.磷酸转移效率计算:基于HPLC分离产物(保留时间偏差≤0.2min)
5.反应体系pH依赖性测试:梯度缓冲液系统(pH6.0-8.5)
1.生物样本:血清蛋白组、细胞裂解液、线粒体提取物
2.重组蛋白:His标签融合激酶、GST标记底物蛋白
3.药物筛选样本:激酶抑制剂/激活剂化合物库(浓度范围0.1nM-10μM)
4.食品添加剂:磷酸化改性淀粉、植酸酶处理谷物
5.工业酶制剂:碱性磷酸酶粗提物、ATP再生系统组分
1.ISO21571:2019生物技术-蛋白质磷酸化定量指南
2.ASTME2947-16放射性同位素法测定酶活性标准规程
3.GB/T35809-2018食品中磷酸化蛋白质检测方法
4.ISO10993-18:2020医疗器械材料生物相容性评价-磷酸化产物分析
5.GB/T38165-2019临床诊断用酶活性测定通用要求
1.ThermoFisherQExactiveHF-X质谱仪:Orbitrap检测器(分辨率240,000)
2.PerkinElmerEnVision多模式读板机:时间分辨荧光检测(TRF模式)
3.Agilent1260InfinityIIHPLC系统:ZORBAXSB-C18色谱柱(4.6150mm)
4.BeckmanCoulterDTX880微板检测仪:化学发光模块(动态范围6logs)
5.MalvernZetasizerNanoZSP:动态光散射模块(粒径检测0.3nm-10μm)
6.EppendorfBioSpectrometerbasic:紫外/可见分光光度计(波长范围190-830nm)
7.Bio-RadMini-PROTEANTetra电泳系统:TGXFastCast胶试剂盒
8.GEHealthcareKTApure蛋白纯化系统:HisTrapHP预装柱
9.SartoriusCubisII分析天平:称量精度0.001mg
10.MemmertCO2培养箱:温度控制精度0.1℃
报告:可出具第三方检测报告(电子版/纸质版)。
检测周期:7~15工作日,可加急。
资质:旗下实验室可出具CMA/CNAS资质报告。
标准测试:严格按国标/行标/企标/国际标准检测。
非标测试:支持定制化试验方案。
售后:报告终身可查,工程师1v1服务。
以上是与偶联磷酸化作用检测相关的简单介绍,具体试验/检测周期、检测方法和仪器选择会根据具体的检测要求和标准而有所不同。北检研究院将根据客户需求合理的制定试验方案。