检测项目

1.病原菌分离培养：采用PDA培养基（pH5.60.2），25℃恒温培养5-7天

2.分生孢子形态测定：测量长度（18-25μm）与宽度（4-6μm），隔膜数（3-5个）

3.致病性验证：离体叶片接种试验（温度251℃，湿度≥90%）

4.分子生物学鉴定：ITS序列分析（引物ITS1/ITS4），PCR扩增产物500-600bp

5.病斑特征分析：测量病斑直径（2-8mm），边缘红褐色环带宽度（0.3-0.8mm）

检测范围

1.茶树鲜叶样本（含水率65-75%）

2.干制成品茶（含水率≤7%）

3.茶园土壤样本（深度0-20cm）

4.茶树修剪枝条（直径3-8mm）

5.茶苗组培材料（苗龄30-60天）

检测方法

1.ISO7954:2021《植物病原真菌分离培养通用技术规范》

2.GB/T23205-2008《茶叶中病原菌分子生物学检测方法》

3.GB/T36852-2018《农作物病害田间诊断规程》

4.ASTMD8083-21《植物病原真菌显微形态测量标准指南》

5.ISO21527-2:2008《真菌孢子计数与分类方法》

检测设备

1.OlympusBX53生物显微镜（1000油镜观察孢子结构）

2.Bio-RadT100PCR仪（DNA扩增程序：94℃预变性5min）

3.MemmertIPP110培养箱（温度精度0.3℃，湿度控制范围50-95%）

4.SartoriusCP225D电子天平（称量精度0.01mg）

5.ThermoScientific1300系列生物安全柜（A2型，循环风量≥500m/h）

6.Eppendorf5920R高速冷冻离心机（最大转速20,000rpm）

7.BOXUNSHP-150生化培养箱（光照强度3000500Lux可调）

8.LeicaCM1950冷冻切片机（切片厚度5-30μm可调）

9.ThermoNanoDropOne超微量分光光度计（DNA浓度测定精度1ng/μl）

10.ZeissAxioImager.A2全自动显微成像系统（图像分辨率25841936像素）