激酶串联检测

检测项目1.激酶活性测定:ATP消耗速率(μmol/min)、底物转化率(%)、Km值(μM)2.底物特异性分析:32P标记磷酸化效率(cpm/μg)、交叉反应性(%)3.抑制剂筛选:IC50值(nM)、抑制常数Ki(μM)、选择性指数4.磷酸化位点验证:质谱鉴定覆盖率(%)、位点特异性抗体结合效率5.热稳定性测试:Tm值(℃)、热变性速率(%/min)检测范围1.重组蛋白激酶:EGFR、CDK2、MAPK等原核/真核表达体系产物2.细胞裂解液:肿瘤细胞系/原代细胞的胞内激酶复合物3.药物候选分子:小分子

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检测项目

1.激酶活性测定:ATP消耗速率(μmol/min)、底物转化率(%)、Km值(μM)

2.底物特异性分析:32P标记磷酸化效率(cpm/μg)、交叉反应性(%)

3.抑制剂筛选:IC50值(nM)、抑制常数Ki(μM)、选择性指数

4.磷酸化位点验证:质谱鉴定覆盖率(%)、位点特异性抗体结合效率

5.热稳定性测试:Tm值(℃)、热变性速率(%/min)

检测范围

1.重组蛋白激酶:EGFR、CDK2、MAPK等原核/真核表达体系产物

2.细胞裂解液:肿瘤细胞系/原代细胞的胞内激酶复合物

3.药物候选分子:小分子抑制剂/激活剂的体外筛选体系

4.临床样本:血清/组织匀浆液中的异常激酶表达物

5.生物制剂:抗体药物偶联物(ADC)的靶向激酶验证

检测方法

1.放射性标记法:ISO10993-18:2020生物材料评估标准

2.荧光共振能量转移(FRET):ASTME2520-21体外诊断系统规范

3.微量热泳动(MST):GB/T34818-2017生物分子相互作用分析通则

4.表面等离子体共振(SPR):GB/T40154-2021生物传感器技术要求

5.高通量质谱法:ISO/TS20914:2019临床蛋白质组学指南

检测设备

1.PerkinElmerEnVision2105:多模式微孔板读数器(荧光/发光/吸光度)

2.ThermoFisherMultiskanSkyHigh:全波长紫外-可见分光光度计

3.AgilentSeahorseXFe96:实时细胞能量代谢分析系统

4.BrukerDaltonicstimsTOFPro2:四极杆飞行时间质谱仪

5.MalvernPanalyticalMicroCalPEAQ-ITC:等温滴定量热仪

6.Bio-RadBio-Plex200:多重细胞因子检测系统

7.CytivaBiacore8K:高通量表面等离子共振分析仪

8.BeckmanCoulterCytoFLEXSRT:流式细胞分选仪

9.NanoTemperMonolithX:微量热泳动分子互作仪

10.TecanSparkCyto:活细胞动态监测系统

北检(北京)检测技术研究院【简称:北检院】

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