检测项目

1.病原菌分离培养:Sepobasidiumspp.菌落形态特征(直径≥3mm)、产孢结构显微观测(担孢子尺寸8-123-4μm)

2.孢子悬浮液浓度测定:分生孢子计数≥110⁶CFU/mL,活体染色法存活率≥85%

3.菌丝生长速率分析:PDA培养基25℃培养日均扩展直径2.5-3.8mm

4.分子生物学鉴定:ITS序列扩增(引物ITS1/ITS4),PCR产物长度550-600bp

5.侵染强度分级:病斑面积占比≤5%(Ⅰ级)至≥50%(Ⅴ级)五级分类

检测范围

1.柑橘类果树叶片及枝干样本(包括脐橙、蜜柑等)

2.核果类果树病组织(桃树、李树主干分杈处)

3.经济作物茎秆(茶树三年生以上老枝)

4.土壤基质样本(根际土有机质含量≥2%)

5.灌溉水体微生物负载量(过滤膜孔径0.45μm)

检测方法

1.ISO21527-2:2008《真菌孢子计数与活性测定规范》

2.GB/T36852-2018《植物病原真菌分离培养技术规程》

3.ASTMD7786-12《环境样品DNA提取与纯化标准指南》

4.ISO22174:2005《食品链微生物学-分子生物学检测通用要求》

5.GB/T19495.6-2018《转基因产品检测核酸定量PCR方法》

检测设备

1.奥林巴斯BX53研究级显微镜:配备DP27摄像系统,400油镜观测孢子形态

2.ThermoFisherQuantStudio5实时荧光定量PCR仪:支持TaqMan探针法绝对定量

3.MemmertIPP110培养箱:温度控制精度0.3℃,湿度范围30-95%RH

4.Sartorius纯水系统(型号:ariumproVF):产水电阻率18.2MΩcm

5.EppendorfCentrifuge5910Ri高速冷冻离心机:最大转速21,330g

6.BioTekSynergyH1酶标仪:支持荧光/光吸收双模式读数

7.LeicaCM1950冷冻切片机:样本切片厚度5-30μm可调

8.MettlerToledoXSR205DU分析天平:称量精度0.01mg/0.1mg

9.ESCOAC2-4S1生物安全柜:HEPA过滤器效率99.99%@0.3μm

10.Milipore微生物限度检测系统(型号:MilliflexQuantum):集菌培养一体化操作