检测项目

1.病原菌分离培养：采用PDA培养基（马铃薯葡萄糖琼脂），培养温度251℃，湿度85%

2.菌丝形态学鉴定：测量菌丝直径（5-12μm）、分支角度（近直角）、隔膜间距（50-150μm）

3.分子生物学检测：ITS序列分析（引物ITS1/ITS4），PCR扩增条件：94℃预变性5min，35循环（94℃30s/55℃30s/72℃1min）

4.致病力测定：接种浓度110⁶孢子/mL，潜育期7-14天评估病斑扩展速率

5.抗药性监测：多菌灵（Carbendazim）梯度浓度0.1-100μg/mL测定EC50值

检测范围

1.香瓜植株样本：叶片病斑组织（直径＞3mm）、茎基部褐变区段（长度≥2cm）

2.土壤样本：根际土（深度0-20cm）、病株周围半径50cm混合土样

3.种子材料：带菌种皮（表面消毒后培养）、种仁浸出液沉淀物

4.农用器具：移栽机具残留物（取样面积10cm）、修剪刀具刮取物

5.灌溉水体：过滤膜法收集悬浮微生物（孔径0.45μm滤膜）

检测方法

1.ISO16140-3:2021《食品链微生物学-验证协议-第3部分》用于分离株确证

2.GB/T3543.5-1995《农作物种子检验规程真实性和品种纯度鉴定》病害种子处理规范

3.ASTMD8083-16《土壤中病原真菌定量标准指南》土壤样本前处理方法

4.NY/T401-2000《脱毒蔬菜种苗病毒检测技术规程》适用于组培苗带菌检测

5.SN/T1809-2006《进出境植物种子真菌病害检疫规程》跨境检疫技术标准

检测设备

1.ThermoScientificHerathermIGS60微生物培养箱：温控精度0.2℃，湿度波动≤3%RH

2.OlympusBX53荧光显微镜：配备DP80双摄像头系统（分辨率40803072）

3.Bio-RadT100PCR仪：支持梯度PCR（温度均一性0.3℃）

4.SartoriusQuintix224-1CN分析天平：称量精度0.1mg/220g

5.MemmertIPP110培养箱：CO₂浓度控制范围0-20%（精度0.1%）

6.Eppendorf5920R高速离心机：最大转速20,000rpm（RCF28,913g）

7.MiliporeMilli-QIQ7000超纯水系统：电阻率18.2MΩcm@25℃

8.ThermoNanoDropOneC紫外分光光度计：核酸浓度测量范围2-27,000ng/μL

9.EscoAC2-4S1生物安全柜：垂直层流风速0.3m/s20%

10.MettlerToledoSevenExcellencepH计：测量精度0.002pH