检测项目
1.病原菌分离培养:采用PDA培养基(pH6.80.2),培养温度251℃,湿度85%RH
2.分生孢子形态测量:长度15-28μm3.5-5μm,隔膜数1-3个
3.分子生物学鉴定:ITS序列扩增(引物ITS1/ITS4),扩增产物长度500-600bp
4.致病性验证:离体叶片接种试验(孢子悬浮液浓度110⁶CFU/mL)
5.抗药性分析:嘧菌酯EC50值测定(浓度梯度0.01-100μg/mL)
检测范围
1.水稻叶片病斑样本(含典型轮纹状褐斑)
2.小麦植株茎秆组织(基部褐变部位)
3.玉米籽粒带菌率检测(千粒重≥250g)
4.草坪草根系腐解物(腐殖质含量≥30%)
5.土壤残留菌核量(耕作层0-20cm样本)
检测方法
1.ISO21458:2018《植物病原真菌分子检测规范》
2.GB/T3543.6-2023《农作物种子检验规程病害检验》
3.ASTMD7993-15《植物病原体实时荧光定量PCR标准方法》
4.NY/T3088-2017《水稻病害诊断技术规程》
5.SN/T5364.3-2021《进出口植物病原真菌检疫鉴定方法》
检测设备
1.OlympusBX53荧光显微镜(1000油镜观察孢子形态)
2.Bio-RadT100PCR仪(支持梯度退火程序)
3.ThermoScientificMultiskanSkyHigh酶标仪(波长范围340-850nm)
4.EppendorfCentrifuge5430R高速离心机(最大转速30,000rpm)
5.MemmertICP600恒温培养箱(温度波动0.3℃)
6.SartoriusQuintix224-1CN分析天平(精度0.1mg)
7.IlluminaMiSeq基因测序仪(双端300bp读长)
8.LeicaCM1950冷冻切片机(切片厚度5-50μm可调)
9.ShimadzuUV-2600i分光光度计(波长精度0.3nm)
10.ThermoScientificHeratherm微生物培养箱(CO₂浓度控制0.1%)