检测项目
1.形态学鉴定:菌丝直径(3.5-5.2μm)、孢子尺寸(5-86-10μm)、冬孢子表面纹路特征
2.分子生物学检测:ITS序列比对(GenBank数据库)、EF1-α基因扩增(引物EF1-983F/EF1-2218R)
3.孢子浓度测定:血球计数板法(0.1mm深度)、分光光度法(OD600值校准)
4.致病性测试:寄主植物接种试验(水稻幼苗侵染率≥85%)
5.抗药性分析:戊唑醇EC50值测定(0.05-0.3μg/mL梯度浓度)
检测范围
1.农作物种子:水稻、小麦、玉米等禾本科作物原种
2.土壤样本:耕作层(0-30cm)微生物群落分析
3.植物组织:茎秆基部侵染部位切片样本
4.农产品加工品:谷物制品孢子残留量检测
5.环境样本:灌溉水样孢子沉降量监测
检测方法
ISO17075:2017《植物病原真菌分子检测通用规范》
GB/T23222-2008《农作物种子病害检验规程》
ASTME1755-01(2020)《显微镜法测定真菌孢子浓度标准方法》
NY/T3087-2017《水稻黑粉菌检疫鉴定技术规范》
SN/T5364.4-2021《进出口植物产品检疫处理规程第4部分:真菌灭活》
检测设备
1.Bio-RadCFX96Touch实时荧光定量PCR仪(ITS基因扩增)
2.OlympusBX53荧光显微镜(孢子形态400显微观察)
3.ThermoScientificMultiskanSkyHigh酶标仪(OD600吸光度测定)
4.EppendorfCentrifuge5430R高速冷冻离心机(DNA提取)
5.MemmertICP600恒温培养箱(28℃1℃菌株培养)
6.SartoriusQuintix224-1CN分析天平(0.1mg精度称量)
7.LeicaCM1950冷冻切片机(植物组织样本制备)
8.MilliporeMilli-QIQ7000超纯水系统(试剂配制用水)
9.ThermoScientificHeratherm安全柜(生物安全二级操作)
10.Agilent4200TapeStation系统(DNA质量完整性分析)