检测项目
1.形态学鉴定:菌落直径(25℃培养7天)、分生孢子梗长度(80-150μm)、分生孢子形态(圆柱形至倒棍棒形)、孢子分隔数(3-7个)及基脐宽度(1.5-2.5μm)。
2.分子生物学检测:ITS序列扩增(引物ITS1/ITS4)、TEF1-α基因片段分析(引物EF1-983F/EF1-2218R)、β-tubulin基因比对(引物T1/Bt2b)。
3.致病性测试:离体叶片接种法(接种浓度110⁶孢子/mL)、病斑扩展速率(25℃下日均增长0.8-1.2mm)。
4.生理生化特性:最适生长温度(22-28℃)、碳源利用谱(葡萄糖/麦芽糖阳性)、耐盐性测试(NaCl耐受阈值≤4%)。
5.抗药性监测:多菌灵EC50值测定(敏感型≤5μg/mL)、嘧菌酯抑制中浓度(抗性型>50μg/mL)。
检测范围
1.蕨类植物活体样本:包括鳞毛蕨科、蹄盖蕨科等34属植物叶片病斑组织。
2.农产品进出口检疫:鲜切花(尤以观叶蕨类为主)、种苗及繁殖材料。
3.土壤及栽培基质:病原菌存活体定量检测(灵敏度≥10CFU/g)。
4.农药残留试验样本:杀菌剂处理后的病原菌复苏能力评估。
5.实验室保藏菌株:ATCC/CBS等国际菌种库的复核鉴定。
检测方法
ISO17025:2017《真菌形态学鉴定通用规范》第4.2章孢子测量规程;GB/T30957-2014《植物病原真菌分子检测技术指南》;ASTME2275-19《离体植物病害接种试验标准》;SN/T2966-2011《进出境种苗真菌检疫规程》;EPPOPM7/129(1)毛蕨假尾孢专项鉴定方案。
检测设备
OlympusBX53荧光显微镜(1000油镜观察孢子细微结构);Bio-RadT100ThermalCyclerPCR仪(基因扩增);IlluminaMiSeq测序平台(全基因组比对);ThermoScientificHerathermIGS60恒温培养箱(温控精度0.3℃);SartoriusQuintix224-1CN分析天平(称量精度0.1mg);LeicaCM1950冷冻切片机(组织样本前处理);ThermoNanoDropOne超微量分光光度计(DNA纯度OD260/280测定);BinderKBF720恒湿培养箱(湿度控制范围30-90%RH);Agilent1260InfinityIIHPLC系统(杀菌