检测项目

1.病原菌分离培养:采用PDA培养基(pH5.60.2),28℃暗培养72小时观察菌落形态

2.核酸浓度测定:使用Qubit4.0测定DNA纯度(OD260/280≥1.8)及浓度(≥20ng/μL)

3.ITS序列扩增:引物ITS1/ITS4扩增500-700bp片段(退火温度551℃)

4.木质素含量测定:硫代硫酸钠法测定样本木质素占比(精度0.05%)

5.维管束显微观察:石蜡切片厚度8μm(LeicaRM2235切片机),400倍镜检

检测范围

1.茄科作物(番茄/辣椒/茄子)茎基部维管束样本

2.豆科植物(大豆/蚕豆)根系腐烂组织

3.蔷薇科果树(苹果/梨树)枝干溃疡斑块

4.禾本科作物(玉米/小麦)叶鞘褐变组织

5.林木类(松树/杉木)韧皮部坏死样本

检测方法

1.ISO16140-3:2022《分子生物学方法验证规范》用于病原菌核酸检测

2.GB/T28068-2011《植物病原真菌分离培养技术规程》指导菌株纯化

3.ASTMD7468-22《植物组织核酸提取标准方法》规范DNA制备流程

4.GB/T3543.5-2023《农作物种子检验规程》适用于种子带菌率测定

5.ISO21527-2:2020《真菌毒素检测技术》用于次生代谢产物分析

检测设备

1.ThermoFisherQuantStudio5实时荧光定量PCR仪(病原菌核酸检测)

2.LeicaDM750生物显微镜(400倍显微观察配备LASV4.12图像系统)

3.EppendorfCentrifuge5430R高速冷冻离心机(最大转速30,000rpm)

4.MemmertIPP110恒温培养箱(温度控制精度0.3℃)

5.SartoriusQuintix224-1CN分析天平(称量精度0.1mg)

6.BioTekSynergyH1酶标仪(波长范围200-999nm)

7.MilestoneETHOSUP微波消解仪(40位转子容量)

8.Agilent1260InfinityIIHPLC系统(色谱柱ZORBAXSB-C18)

9.OlympusBX53荧光显微镜(配备DP80双摄像头系统)

10.LabconcoFreeZone2.5L冷冻干燥机(冷阱温度-84℃)