检测项目

1.立克次体核酸检测：采用Real-timePCR技术检测ompA基因片段（引物序列：Rr190.70p/Rr190.701n；探针：FAM-5'-CGCTGCGGCTGGCTCCGCCT-3'-BHQ1）

2.IgM/IgG抗体检测：间接免疫荧光法（IFA）测定血清效价（临界值≥1:64），酶联免疫吸附试验（ELISA）OD值≥0.5判为阳性

3.病原体分离培养：Vero细胞系接种培养（培养基pH7.2-7.4），观察5-7天细胞病变效应（CPE）

4.外斐氏反应：OX19抗原凝集效价≥1:160具有诊断意义

5.全基因组测序：IlluminaNovaSeq6000平台完成2150bp双端测序（覆盖度≥30）

检测范围

1.虱样本：体虱（Pediculushumanuscorporis）消化道组织悬液

2.临床样本：急性期患者全血（EDTA抗凝）、血清（采集后2小时内分离）

3.环境样本：疫区衣物纤维残留物（采集面积10cm10cm）

4.病理标本：尸检皮肤焦痂组织（福尔马林固定石蜡包埋）

5.生物安全样本：BSL-3实验室培养物灭活处理液（0.5%甲醛作用24小时）

检测方法

1.ISO15189:2012《医学实验室质量和能力要求》血清学检测规范

2.GB/T38503-2020《消毒剂实验室杀菌效果检验方法》灭活效果验证

3.WS/T635-2018《流行性斑疹伤寒诊断标准》临床病例判定依据

4.ASTME2888-19《实时荧光定量PCR方法验证标准指南》核酸扩增质控

5.GB19489-2008《实验室生物安全通用要求》病原体操作规范

检测设备

1.实时荧光定量PCR仪：ABI7500FastDx（温度精度0.25℃，支持TaqMan探针检测）

2.生物安全柜：ESCOAirstreamClassIIB2型（100%外排气流，HEPA过滤效率99.99%）

3.全自动酶免分析仪：BioTekELx808（温育精度0.3℃，读数波长450/630nm）

4.冷冻离心机：Eppendorf5424R（最大转速15,300rpm，温控范围-9℃至40℃）

5.荧光显微镜：OlympusBX53（激发滤片BP470-495，发射滤片BA510-550）

6.核酸提取仪：QiagenQIAcube（磁珠法提取效率≥95%，交叉污染率＜0.1%）

7.CO₂培养箱：ThermoScientificHeracellVIOS160i（温度波动0.2℃，CO₂控制精度0.1%）

8.电泳系统：Bio-RadPowerPacBasic（输出电压10-300V，电流400mA）

9.超低温冰箱：HaierDW-86L628J（-86℃恒温存储，温度均匀性3℃）

10.生物分子相互作用分析仪：BiacoreX100（检测限1pg/mm，实时监测抗原抗体结合动力学）