检测项目

1.直接镜检：采用10%KOH溶液处理样本后观察菌丝/孢子形态（400光学显微镜）

2.真菌培养：接种于沙氏葡萄糖琼脂培养基（SDA），28℃培养2-4周

3.分子生物学检测：PCR扩增ITS区域（引物ITS1/ITS4），测序比对GenBank数据库

4.药敏试验：微量稀释法测定MIC值（特比萘芬0.03-16μg/mL）

5.乳酸酚棉蓝染色：观察分生孢子结构（1000油镜）

检测范围

1.皮屑样本：足底鳞屑型/水疱型病变表皮组织

2.甲屑样本：甲板远端侧缘下碎屑（厚度≤0.5mm）

3.水疱液：未破裂水疱无菌穿刺采集浆液

4.趾间浸渍样本：糜烂面刮取物（需避开坏死组织）

5.毛发根部：拔取病发毛根进行伍德灯筛查

检测方法

ISO21527-1:2008真菌分离培养技术规范

CLSIM38-A2丝状真菌药敏试验标准

GB/T14926.64-2012实验动物真菌检测方法

WS/T497-2017侵袭性真菌病临床实验室诊断操作指南

ASTME2149-2013a抗真菌活性定量测定方法

检测设备

OlympusCX43生物显微镜：配备相差增强器（PHC）观察菌丝结构

Bio-RadT100PCR仪：支持梯度PCR程序（退火温度52-60℃）

ThermoScientificHeracell150iCO₂培养箱：温度波动0.5℃

SensititreYeastOneYO10板：包含9种抗真菌药物浓度梯度

IlluminaMiSeq测序平台：PE300模式进行ITS序列分析

BioscreenC全自动生长曲线分析仪：监测真菌生长速率

梅里埃VITEKMS质谱仪：MALDI-TOF技术快速鉴定菌种

ESCOClassII生物安全柜：达到ISO14644-1Class5标准

METTLERTOLEDOXSR205电子天平：称量精度0.01mg配制培养基

MemmertIN55恒温干燥箱：玻璃器皿灭菌程序（180℃2h）