检测项目
1.酶联免疫吸附试验(ELISA):检测血清中EIAV抗体,灵敏度≥99.2%,特异性≥98.5%
2.琼脂凝胶免疫扩散试验(AGIDT):核心抗原p26抗体检测,反应时间18-24小时
3.实时荧光定量PCR:病毒前病毒DNA定量分析,检测限≤10copies/μl
4.免疫印迹法(WesternBlot):gp90/gp45蛋白带型确认,分辨率0.1ng/mm
5.血液涂片镜检:单核细胞包涵体观察,染色采用改良瑞氏法
检测范围
1.马属动物血清样本:包括马、驴、骡等血清分离物
2.全血抗凝样本:EDTA-K2抗凝处理(浓度1.5mg/ml)
3.组织病理样本:脾脏/骨髓石蜡切片(厚度4-6μm)
4.精液/胚胎生物制品:冷冻保存的遗传物质样本
5.环境拭子样本:马厩设备表面采样(面积1010cm)
检测方法
1.OIETerrestrialManual2023Chapter3.6.7规定AGIDT标准操作程序
2.GB/T22915-2008《马传染性贫血诊断技术》ELISA法执行标准
3.ISO/IEC17025:2017实验室质量体系控制要求
4.ASTMF2384-10(2020)生物安全柜操作规范
5.NY/T569-2020动物疫病PCR检测通用技术要求
检测设备
1.ThermoFisherMultiskanFC酶标仪:波长范围450-650nm,精度1%
2.Bio-RadCFX96实时荧光定量PCR仪:支持6通道荧光检测
3.EppendorfCentrifuge5430R:最大转速30,000rpm,温控1℃
4.LeicaCM1950冷冻切片机:切片精度1μm步进马达
5.OlympusBX53荧光显微镜:配备DP80双CCD成像系统
6.SartoriusQuintix224-1CN分析天平:称量精度0.1mg
7.MemmertINCO108培养箱:温度均匀性0.3℃
8.ThermoScientific1300系列生物安全柜:A2型二级防护
9.MiltenyiBiotecGentleMACS组织处理器:程序化裂解参数设置
10.Agilent4200TapeStation电泳系统:DNA完整性数值化分析