检测项目
1.花粉活力测定:采用TTC染色法或离体萌发法(萌发培养基:10%蔗糖+0.01%硼酸),活力指数≥70%为合格
2.柱头可授性分析:苯胺蓝染色法观测柱头分泌物(荧光显微镜波长:365nm),粘液覆盖率≥85%判定有效
3.自交结实率统计:人工套袋授粉后计算结实数/总花数100%,重复3次取平均值
4.胚胎发育监测:石蜡切片法观察胚珠发育阶段(切片厚度8-10μm),统计败育率
5.遗传稳定性验证:SSR分子标记分析(引物数量≥15对),多态性位点≤5%视为稳定
检测范围
1.农作物种子:水稻、小麦、玉米等禾本科自交系材料
2.园艺植物:月季、菊花等观赏植物F1代杂交种
3.林木种质资源:油松、杉木等裸子植物育种材料
4.中药材栽培品种:黄芪、当归等多年生草本植物
5.转基因作物:Bt棉花、抗除草剂大豆等基因编辑品种
检测方法
ISO21703:2018植物生殖生物学-自交亲和性评价规范
GB/T3543.5-1995农作物种子检验规程真实性和品种纯度鉴定
ASTME2455-19植物花粉活力标准测试方法
NY/T1433-2020农作物品种特异性、一致性和稳定性测试指南
ISO10634:2018植物胚胎学分析技术规范
检测设备
1.OlympusCX43荧光显微镜:柱头分泌物显微观测(物镜倍数40/100)
2.ThermoScientificHeratherm培养箱:花粉离体培养(温度梯度控制0.5℃)
3.LeicaRM2235切片机:胚珠石蜡切片制备(精度1μm)
4.Bio-RadT100PCR仪:SSR分子标记扩增(升降温速率4℃/s)
5.EppendorfCentrifuge5430R:花粉悬浮液离心(最大转速