检测项目

1.孢子形态学鉴定：测量孢子直径（8-12μm）、表面纹饰（网状突起）、颜色（深褐色）及萌发孔特征

2.核糖体DNAITS区序列分析：扩增ITS1-5.8S-ITS2区域（长度550-600bp），与NCBI数据库进行BLAST比对

3.致病性验证：接种健康冰草幼苗（温度252℃，湿度85%），观察14天内菌瘿形成情况

4.脂肪酸甲酯分析：采用MIDISherlock系统检测C18:1ω9c（占比≥35%）等特征性脂肪酸

5.产孢量测定：血球计数板统计每克病组织孢子数（≥110^6CFU/g）

检测范围

1.冰草属植物种子（Agropyroncristatum/A.desertorum等）

2.田间发病植株（茎基部膨大组织）

3.仓储期霉变饲草料

4.耕作层土壤样本（0-20cm深度）

5.农用器械表面残留物

检测方法

ISO21567:2004真菌孢子分离纯化技术规范

GB/T3543.5-1995农作物种子病害检验规程

ASTME1874-14微生物脂肪酸谱分析方法

SN/T2667-2010植物病原真菌实时荧光PCR检测方法

NY/T3087-2017牧草黑粉病菌检疫鉴定技术规程

检测设备

OlympusBX53荧光显微镜：孢子形态观察（1000油镜）及显微成像系统测量

ThermoFisherQuantStudio5实时荧光定量PCR仪：ITS基因扩增（反应体系20μL）

SartoriusCP225D电子天平：样品称量精度0.01mg

ESCOAC2-4S1生物安全柜：病原体二级生物安全操作

MemmertIPP110培养箱：温度控制范围10-70℃0.3℃

MIDISherlock微生物鉴定系统：脂肪酸甲酯气相色谱分析

Bio-RadChemiDocMP成像系统：电泳凝胶图像采集分析

HaierDW-86L386低温保存箱：菌种保藏温度-80℃2℃

MilliporeMilli-QIQ7000超纯水系统：实验用水电阻率18.2MΩcm