可送检的样品类型与对应检测项目

样品类型 典型应用场景 主要检测项目 常用方法 / 参考
血清与血浆 肝纤维化进程评估、慢性肝病随访、结缔组织病胶原代谢研究 脯肽酶总活性、游离脯氨酸释放速率、重复测定精密度复核 甘氨酰-L-脯氨酸底物比色法（二价锰离子激活、茚三酮显色）；WS/T 225-2024血液标本采集要求
尿液 疑似脯肽酶缺乏症筛查、亚氨基二肽尿鉴别、代谢表型研究 尿亚氨基二肽谱（甘氨酰脯氨酸、脯氨酰脯氨酸等）、游离脯氨酸与羟脯氨酸比值 柱前衍生高效液相色谱、液相色谱串联质谱多反应监测；WS/T 348-2024尿液标本采集要求
红细胞与淋巴细胞悬液 遗传性脯肽酶缺乏症酶学表征、家系杂合子筛查 细胞内脯肽酶活性、以每克可溶性蛋白计的比活力、残余活性百分比 细胞裂解后二价锰离子预激活，底物法测定，双缩脲法测定蛋白归一
组织匀浆与成纤维细胞培养物 皮肤与肝组织局部胶原转换研究、细胞模型药理评价 组织酶比活力、胶原降解相关指标联测（羟脯氨酸含量、脯氨酸含量） 匀浆低温离心取上清测定，配套氨基酸分析仪或柱前衍生色谱定量
细胞培养上清与培养基 成纤维细胞与肿瘤细胞胶原侵袭表型研究、分泌型酶活性动态监测 分泌型酶活性、培养时间梯度活性曲线、无血清培养条件对照 培养基模拟液平行对照扣除显色背景，动力学分光光度法监测
酶制剂与纯化组分 重组脯肽酶表达纯化评价、酶制剂批间一致性、固定化酶活性回收 比活力、米氏常数、最大反应速率、激活剂依赖性、热稳定性 底物梯度动力学拟合、分光光度连续监测、GB/T 26124-2011试剂盒质量要求

检测项目

1. 血清脯肽酶总活性：底物甘氨酰-L-脯氨酸，反应体系pH7.8-8.3，二价锰离子终浓度1-2mmol/L预激活，37-40℃恒温反应15-45分钟，结果以U/L报告

2. 游离脯氨酸释放量：茚三酮酸性介质沸水浴显色，530nm附近分光光度比色，脯氨酸标准曲线定量范围0-1000μmol/L

3. 尿亚氨基二肽谱：甘氨酰脯氨酸、脯氨酰脯氨酸等特征二肽定性定量，质谱多反应监测定量下限可达nmol/L级

4. 细胞与组织酶比活力：以每克可溶性蛋白的活力单位表示，配套双缩脲法或考马斯亮蓝法定量蛋白

5. 酶动力学表征：底物梯度0.25-20mmol/L拟合米氏常数与最大反应速率，评估二价锰离子激活依赖性与热稳定性

检测范围

1. 临床生化样品：空腹静脉血清、肝素或乙二胺四乙酸抗凝血浆、晨尿与随机尿

2. 细胞样品：红细胞悬液、外周血淋巴细胞分离液、皮肤成纤维细胞培养物

3. 组织样品：肝组织与皮肤组织匀浆上清液

4. 科研培养体系：细胞培养上清、无血清培养基模拟液

5. 酶工程样品：重组表达酶液、柱纯化各收集组分、固定化酶载体洗脱液

检测方法

1. WS/T 225-2024《临床血液标本的采集与处理》：规定血清血浆采集、离心与保存条件

2. WS/T 348-2024《尿液标本的采集与处理》：规范尿液采集、防腐与转运要求

3. GB/T 9721-2006《化学试剂 分子吸收分光光度法通则（紫外和可见光部分）》：茚三酮显色产物比色定量的方法基础

4. GB/T 26124-2011《临床化学体外诊断试剂（盒）》：临床化学酶活性测定试剂（盒）的质量要求与试验方法

5. YY/T 0654-2017《全自动生化分析仪》：酶活性连续监测的仪器性能要求

6. ISO 15193:2026 体外诊断医疗器械 生物源性样本中量的测量 参考测量程序：量值溯源与方法学评价框架

检测设备

1. 紫外-可见分光光度计：波长范围190-1100nm，光谱带宽1nm，配1cm石英比色皿于530nm读数

2. 全自动生化分析仪：恒温比色池控温精度±0.1℃，支持340-800nm双波长连续监测

3. 恒温水浴与干式恒温器：控温范围室温-100℃，精度±0.5℃，满足37-40℃酶反应孵育

4. 高速冷冻离心机：最大转速15000rpm，温控4℃，用于血清分离与匀浆上清制备

5. 高效液相色谱仪：配紫外与荧光检测器，用于氨基酸与亚氨基二肽谱分析

6. 液相色谱串联质谱联用仪：多反应监测模式，定量下限达nmol/L级，用于尿特征二肽确证

7. 恒温振荡孵育器：37℃±0.5℃，定时范围0-24小时，用于锰离子预激活与底物反应

8. 漩涡混匀器：转速300-3000rpm，用于显色反应前试剂混匀

9. 酶标仪：波长450-630nm可选，支持96孔板高通量酶活性筛查

10. 精密移液器：量程覆盖0.1-1000μL，系统误差不超过±0.5%