可送检的样品类型与对应检测项目
| 样品类型 | 典型应用场景 | 主要检测项目 | 常用方法 / 参考 |
|---|---|---|---|
| 小分子合成抑制剂样品 | 先导化合物量效表征、结构类似物活性排序、候选分子比较 | 半抑制浓度全曲线、四参数拟合、置信区间报告 | 四参数Logistic协议口径；GB/T 36756-2018 工具酶活性测定通用要求 |
| 天然产物与植物提取物 | 多酚、黄酮、生物碱类组分抑制能力比较、活性部位追踪 | 剂量效应曲线、半抑制浓度、平台核对 | T/SHRH 015-2018 化妆品 酪氨酸酶活性抑制实验方法（提取物抑制活性参照） |
| 化妆品功效原料 | 美白原料酪氨酸酶抑制、抗皱原料胶原酶与弹性蛋白酶抑制筛选 | 半抑制浓度比较、抑制率曲线、原料间量效排序 | T/SHRH 015-2018 酪氨酸酶活性抑制实验方法；GB/T 35538-2017 工业用酶制剂测定技术导则 |
| 蛋白与多肽类抑制剂 | 大豆胰蛋白酶抑制剂、多肽抑制因子、微生物来源抑制蛋白表征 | 表观半抑制浓度、抑制曲线平台核对、剂量范围摸索 | GB/T 46002-2025 胰蛋白酶抑制剂活性测定（大豆及其加工产品参照） |
| 农用化学品靶标酶体系 | 除草剂、杀虫剂靶标酶抑制量效评价、复配组分比较 | 抑制率梯度、半抑制浓度、剂量效应斜率 | 靶标酶量效协议口径；GB/T 36756-2018 通用要求 |
| 酶制剂体系干扰核查 | 酶制剂中抑菌剂、稳定剂对酶活抑制排查、配方相容性考察 | 抑制核查曲线、表观半抑制浓度、阈值浓度定位 | GB/T 35538-2017 工业用酶制剂测定技术导则 |
检测项目
1. 半抑制浓度测定：抑制剂浓度梯度跨两至三个数量级、设8~12个浓度点，按四参数Logistic模型拟合求取，结果须注明底物浓度、酶载量与预孵育时间等条件（协议口径）
2. 曲线参数报告：上渐近线、下渐近线、半抑制浓度、Hill斜率四个参数与95%置信区间同时报告，不单独以中点数值作结论
3. Hill斜率核读：以1为参照，明显偏离1提示协同结合、位点异质性或结合未达平衡，须延长预孵育复测核别
4. 曲线平台核对：上平台应回到无抑制活性水平、下平台应趋近完全抑制，平台偏移须排查溶解度、酶载量与信号干扰来源
5. 表观判别与Ki边界：以不同底物浓度下表观半抑制浓度的移动方向做抑制类型表观判别，Ki按竞争型Cheng-Prusoff换算关系另行测定（协议口径）
检测范围
1. 小分子抑制剂：丝氨酸蛋白酶抑制剂、酪氨酸酶抑制剂、乙酰胆碱酯酶抑制剂等
2. 天然产物提取物：多酚类、黄酮类、生物碱类、鞣质类活性组分
3. 生物大分子抑制剂：多肽抑制因子、蛋白类抑制剂、凝集素类结合蛋白
4. 化妆品功效原料：美白类、抗皱类、舒缓类酶抑制靶点原料
5. 农药与靶标酶体系：乙酰胆碱酯酶、乙酰乳酸合成酶等靶标酶抑制体系
检测方法
1. GB/T 36756-2018 工具酶活性测定通用要求
2. GB/T 35538-2017 工业用酶制剂测定技术导则
3. T/SHRH 015-2018 化妆品 酪氨酸酶活性抑制实验方法
4. GB/T 46002-2025 动物饲料 大豆及其加工产品中胰蛋白酶抑制剂活性的测定
5. GB/T 28715-2012 饲料添加剂 酸性、中性蛋白酶活力的测定 分光光度法
检测设备
1. 紫外可见分光光度计(岛津UV-1900i)：波长范围190~1100nm，速率扫描支持秒级采样，用于各浓度点酶活与抑制率测定
2. 双光束紫外分光光度计(Agilent Cary 60)：波长190~900nm，恒温池架控温8~55℃，浓度点平行采集与对照扣除
3. 微孔板酶标仪(Thermo Varioskan LUX)：波长200~1000nm，动力学模式支持96孔板浓度梯度批量孵育与读数
4. 荧光分光光度计(日立F-7100)：激发与发射波长200~900nm，用于荧光底物体系的抑制率测定
5. 高效液相色谱仪(岛津LC-2050C)：二元高压梯度，流速0.001~3mL/min，用于产物生成的色谱定量复核
6. 超微量紫外分光光度计(NanoDrop One)：样本量0.5~2微升，酶浓度与纯度核查，支撑酶载量一致性控制
7. 多通道移液器(艾本德Research plus)：8道与12道配置，量程0.5~1200微升，半对数稀释系列配制
8. 恒温孵育摇床(赛默飞MaxQ 8000)：控温范围室温加5~80℃，转速25~400rpm，抑制剂与酶预孵育控温
9. 高速冷冻离心机(艾本德5427 R)：转速16000rpm级，温控-10~40℃，酶液澄清与析出物去除
10. 精密pH计(梅特勒FE28)：分辨率0.001pH，缓冲液配制与反应条件校核