检测项目

1.病原菌分离培养：采用CMA选择性培养基（玉米粉琼脂培养基），培养温度251℃，湿度90%RH，观察菌落形态及孢子囊特征

2.分子生物学检测：ITS1/ITS4引物扩增rDNA-ITS区段（目标片段长度500-700bp），PCR退火温度55℃，循环数35次

3.土壤理化指标：pH值测定（电极法0.1精度）、EC值（电导率仪0-20mS/cm量程）、有机质含量（重铬酸钾氧化法）

4.植株生理指标：根系活力（TTC法测定脱氢酶活性）、木质素含量（乙酰溴比色法OD280nm）

5.抗药性检测：甲霜灵梯度浓度测试（0.1-100μg/mL），EC50值计算

检测范围

1.番茄植株样本：根际土壤（0-20cm深度）、茎基部病变组织（直径≥3mm病斑）

2.育苗基质：泥炭/蛭石混合基质（粒径≤5mm）、椰糠发酵物（含水率≤40%）

3.灌溉水样：地下水/地表水（需过滤0.45μm膜）

4.种子处理剂：福美双悬浮种衣剂（有效成分≥30%）、咯菌腈可湿性粉剂（粒径D90≤15μm）

5.有机肥料：畜禽粪便堆肥（腐熟度C/N比≤20）、生物炭改良剂（比表面积≥300m/g）

检测方法

ISO16140-3:2022《食品链微生物学方法验证第3部分》用于病原菌分离验证

GB/T36837-2018《植物检疫性病害检测规程疫霉属》规范分子检测流程

ASTMD2974-20《泥炭材料测试标准》指导育苗基质分析

NY/T1121.6-2006《土壤检测第6部分：土壤有机质测定》规定灼烧失重法

GB/T3543.4-1995《农作物种子检验规程发芽试验》评估带菌种子萌发率

检测设备

Bio-RadT100ThermalCycler：完成病原菌ITS区段PCR扩增程序

Eppendorf5424R离心机：12000rpm转速处理DNA提取样本

OlympusBX53显微镜：400油镜观察孢子囊形态（长宽比≥1.3）

MettlerToledoFE28pH计：测量土壤pH值（分辨率0.01pH）

SartoriusMA35水分仪：测定有机肥含水率（精度0.1%）

Agilent4200TapeStation系统：进行DNA完整性分析（DV200≥60%）

ThermoScientificMultiskanSkyHigh酶标仪：读取抗药性测试OD600值

HachHQ40D多参数水质分析仪：检测灌溉水电导率（量程0-2000μS/cm）

PerkinElmerPinAAcle900T原子吸收光谱仪：测定土壤重金属含量（检出限0.01ppm）

LeicaCM1950冷冻切片机：制备根系组织显微样本（厚度10μm2μm）