检测项目

1.病原菌分离培养:采用PDA培养基(pH5.6-6.2),251℃暗培养7-14天

2.菌丝形态学鉴定:测量菌丝直径(3.5-8.2μm)、隔膜间距(50-200μm)及分生孢子特征

3.分子生物学检测:ITS序列扩增(引物ITS1/ITS4),PCR产物长度500-600bp

4.土壤菌丝密度测定:定量PCR法测定单位土壤DNA含量(≥0.5ng/μL)

5.根系侵染率统计:显微观察法计算侵染面积占比(精度0.1%)

检测范围

1.荚蒾属植株样本(Viburnumspp.)包括根茎叶组织切片

2.苗圃栽培基质(泥炭土:珍珠岩=3:1混合基质)

3.灌溉水样(采集量≥500mL/批次)

4.发病区周边植物根系样本(半径50m内)

5.土壤剖面样本(分层采集0-30cm深度)

检测方法

1.ISO21458:2018《植物病原真菌分子鉴定技术规范》

2.GB/T36743-2018《土壤微生物生物量测定方法》

3.ASTMD7907-14《植物病原菌分离培养标准指南》

4.GB/T3543.4-1995《农作物种子检验规程》病害检验

5.ISO17601:2016《土壤DNA提取与定量方法》

检测设备

1.PCR扩增仪(ABIVeritiPro):温度精度0.1℃,支持梯度PCR

2.荧光显微镜(OlympusBX53):配备DP80双摄像头系统(分辨率40803072)

3.超净工作台(ESCOACB-4A1):洁净度ISO5级(≤3,520颗粒/m)

4.冷冻离心机(Eppendorf5430R):最大转速30,000rpm(RCF100,000g)

5.凝胶成像系统(Bio-RadChemiDocMP):灵敏度0.1ngDNA/band

6.恒温培养箱(MemmertIPP110):温度波动0.3℃,湿度控制范围30-95%RH

7.土壤研磨仪(RetschRM200):粉碎粒径≤0.1mm(符合ISO11464标准)

8.实时荧光定量PCR仪(RocheLightCycler480II):动态范围10^1-10^9拷贝数/反应

9.DNA浓度测定仪(ThermoNanoDropOneC):测量范围2-27,500ng/μL(精度1%)

10.高压灭菌锅(Tuttnauer3870EL):灭菌温度121℃1℃,压力0.22MPa可调