检测项目
1. RB1基因全外显子测序：覆盖全部27个外显子区域（NM_000321.3），测序深度≥100×
2. 荧光原位杂交（FISH）：采用13q14.2探针（RP11-400N9），分辨率≤50kb
3. 甲基化特异性PCR：检测RB1启动子区CpG岛（chr13:48,303,442-48,304,981），灵敏度达0.1%
4. 超声生物显微镜检查：探头频率≥20MHz，轴向分辨率≤80μm
5. 免疫组化分析：采用PHH3抗体（克隆号3H10），染色强度分级参照ASCO/CAP标准
检测范围
1. 肿瘤组织石蜡切片：厚度4-5μm，HE染色符合CLSI MM01-A3标准
2. EDTA抗凝外周血：采集量≥5mL，DNA浓度≥20ng/μL
3. 玻璃体液样本：采集量≥100μL，储存温度-80℃±5℃
4. 羊水细胞培养物：培养代数≤3代，细胞活性≥95%
5. 冷冻肿瘤组织：保存于液氮环境（-196℃），运输温度≤-150℃
检测方法
1. Sanger测序法：依据ISO 15189:2012医学实验室要求
2. 二代测序技术：参照ACMG SF v3.0变异解读指南
3. 超声诊断规范：执行GB/T 41132-2021眼科超声诊断标准
4. 病理切片制备：符合ISO 15189:2012第5.4.4条款要求
5. FISH实验流程：遵循ASCO/CAP HER2检测指南（2018版）
检测设备
1. Illumina NovaSeq 6000系统：全基因组测序通量18Tb/run
2. ABI 3500xL基因分析仪：毛细管长度50cm，分辨率±1bp
3. Leica BOND-III全自动染色机：控温精度±0.5℃，处理速度30片/批
4. QuantStudio 7 Pro实时PCR仪：支持384孔板，温控均匀性±0.25℃
5. GE Voluson E10超声系统：配备RM12L探头（12-24MHz）
6. Zeiss Axio Imager.M2显微镜：物镜数值孔径0.17-0.40
7. Thermo Fisher ArctisXT冷冻切片机：切片厚度调节精度0.5μm
8. Roche Benchmark Ultra免疫组化仪：抗原修复温度125℃±1℃
9. Agilent SureScan微阵列扫描仪：分辨率2μm@532nm/635nm
10. Eppendorf Centrifuge 5430R：最大RCF30,130×g，温控范围-20℃~40℃