检测项目

1.直接镜检:采用10%KOH湿片法观察菌丝/孢子形态(放大倍数400-1000)

2.真菌培养:使用沙氏葡萄糖琼脂培养基(SDA)及马铃薯葡萄糖琼脂(PDA),培养温度28℃2℃,周期4-6周

3.分子生物学检测:PCR扩增ITS区域(引物序列ITS1:5'-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3';ITS4:5'-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3')

4.药敏试验:微量稀释法测定MIC值(测试浓度范围0.03-16μg/mL),涵盖特比萘芬、伊曲康唑等8种抗真菌药物

5.组织病理学检查:PAS染色法观察甲板内菌丝结构(切片厚度4-6μm)

检测范围

1.手足甲屑样本(采集量≥20mg)

2.病变甲板分层标本(近端/远端/侧缘病变区域)

3.甲下碎屑及角化物(含深层组织样本)

4.临床分离菌株(皮肤癣菌/酵母菌/霉菌纯培养物)

5.冷冻保存的核酸样本(DNA浓度≥10ng/μL)

检测方法

ISO21527-1:2008《真菌学检验规程-直接显微镜检查》

GB/T38502-2020《病原微生物实验室生物安全通用准则》

CLSIM38-A2《丝状真菌药敏试验参考方法》

ISO16256:2012《抗真菌药物敏感性试验参考方法》

GB/T35914-2018《皮肤癣菌鉴定规范》

WHO《真菌学诊断实验室手册》(2018版)

检测设备

OlympusBX53显微镜:配备微分干涉对比(DIC)功能,最大放大倍数1000

Bio-RadT100ThermalCycler:支持梯度PCR程序(温度精度0.1℃)

ThermoScientificHeracell150iCO₂培养箱:温控范围5-50℃(波动0.3℃)

SiemensADVIACentaurXP全自动化学发光仪:可定量检测β-D-葡聚糖浓度

SartoriusQuintix224-1CN分析天平:称量精度0.1mg(最大量程220g)

LeicaRM2235轮转式切片机:切片厚度调节范围1-60μm

ThermoNanoDropOne超微量分光光度计:核酸浓度测量范围2-27,000ng/μL

BDBACTECMGIT960全自动分枝杆菌/真菌培养系统:支持液体培养基快速培养