检测项目

1.菌核形态鉴定:测量菌核直径(0.5-15mm)、颜色(黑色至深褐色)、表面纹理(粗糙/光滑)及剖面结构

2.致病力测定:接种后72小时测量病斑扩展速率(mm/h),统计侵染率(%)

3.毒素成分分析:检测草酸含量(≥3.5mmol/L)、细胞壁降解酶活性(PG≥15U/mL)

4.分子生物学检测:PCR扩增ITS序列(引物SS1/SS2),电泳条带比对(500-600bp)

5.抗药性监测:测定菌株对腐霉利EC50值(0.05-2.8μg/mL),判定抗性等级

检测范围

1.新鲜鸭芹植株:茎基部褐变组织样本

2.储存期块茎:表面附着菌核的仓储样品

3.栽培基质:含菌核的土壤/有机肥混合物

4.种子材料:带菌率≥0.3%的播种用种

5.农产品加工品:干制茎叶中的菌核残留物

检测方法

ISO16140-3:2021食品链微生物学-方法验证(致病菌分离培养)

GB/T36852-2018植物病原真菌实时荧光PCR检测通则

ASTME2275-19植物病原体分子诊断标准指南

NY/T401-2000种子带菌率检验规程

SN/T1809-2006进出境植物及其产品中核盘菌检疫鉴定方法

检测设备

1.OlympusBX53荧光显微镜:菌核显微形态观察(400)

2.ThermoNanoDropOne紫外分光光度计:DNA浓度测定(A260/A280比值)

3.Bio-RadT100PCR仪:ITS基因扩增(退火温度58℃)

4.Agilent1260HPLC系统:草酸定量分析(C18色谱柱)

5.MemmertICP600培养箱:病原菌分离培养(201℃)

6.SartoriusCP225D电子天平:培养基称量(精度0.01mg)

7.EppendorfCentrifuge5430R高速离心机:菌体收集(12000rpm)

8.LI-COROdyssey成像系统:WesternBlot检测(700nm通道)

9.METTLERTOLEDOSevenExcellencepH计:培养基pH值校准(0.01)

10.ThermoScientificHeratherm烘箱:样本预处理(105℃灭菌)