检测项目

1.外源DNA污染浓度：检测限≤0.01ng/μL，定量范围0.01-100ng/μL

2.RNA完整性数（RIN）：评估值≥7.0，降解阈值≤5.0

3.蛋白质污染比率：A260/A280比值1.8-2.0，偏差允许±0.1

4.化学残留乙醇含量：浓度≤0.1%，气相色谱检测精度±0.01%

5.RNase酶活性检测：阴性结果要求，灵敏度0.001U/mL

6.颗粒物污染计数：粒径≥0.2μm，最大允许值≤100particles/mL

7.微生物污染水平：菌落形成单位≤10CFU/mL，厌氧菌检测included

8.pH值稳定性：范围7.0-8.0，测量精度±0.1pH单位

9.电泳纯度评估：条带清晰度无降解，smear指数≤10%

10.核酸浓度准确度：相对偏差±5%，绝对浓度范围5-5000ng/μL

11.荧光染料干扰测试：背景荧光值≤100RFU，激发波长485nm

12.金属离子残留：铁离子≤0.1ppm，镁离子≤1.0ppm，ICP-MS检测

检测范围

1.基因组DNA样品：来源于血液、组织，浓度范围10-200ng/μL

2.质粒DNA提取物：超螺旋比例≥90%，宿主DNA污染≤1%

3.总RNA样品：完整性RIN≥8.0，适用于转录组分析

4.mRNA纯化产物：polyA尾enrichment效率≥95%，rRNA残留≤2%

5.cDNA合成产物：全长率≥80%，逆转录酶残留检测

6.PCR扩增产物：非特异性条带≤5%，引物二聚体control

7.核酸提取试剂盒输出：包括硅胶柱法、磁珠法，回收率≥85%

8.测序文库构建样品：适配器连接效率≥90%，insertsize偏差±10bp

9.病毒核酸样品：如SARS-CoV-2RNA，检测限≤10copies/μL

10.细胞培养衍生核酸：避免培养基成分污染，FBS残留≤0.01%

11.环境样本核酸：土壤、水体提取，humicacid抑制物检测

12.临床样本核酸：FFPE组织、唾液，focusondegradationandinhibitorpresence

检测方法

国际标准：

ISO20395:2019Biotechnology—Requirementsforevaluatingtheperformanceofquantificationmethodsfornucleicacids

ASTME2885-19JianCeGuideforMicrovolumeQuantificationofNucleicAcidsusingFluorescenceDetection

ISO20184-1:2018Molecularbiomarkeranalysis—Nucleicacidextraction—Part1:Generalrequirements

ASTME3133-18JianCePracticeforDeterminingDetectionLimitsinNucleicAcidAmplificationTechniques

ISO22174:2005Microbiologyoffoodandanimalfeedingstuffs—Polymerasechainreaction(PCR)forthedetectionoffood-bornepathogens

ISO17822:2020Invitrodiagnosticsystems—Nucleicacidamplification-basedexaminationproceduresfordetectionandidentificationofmicrobialpathogens

ASTME1873-21JianCeGuideforDetectionofNucleicAcidSequencesbythePolymeraseChainReactionTechnique

ISO13073-1:2012Shipsandmarinetechnology—Riskassessmentforbiocontamination—Part1:Generalprinciples

ASTME3022-18JianCeGuideforNucleicAcidSequencingforMicrobialIdentificationandStrainTyping

ISO15189:2022Medicallaboratories—Requirementsforqualityandcompetence

国家标准：

GB/T34796-2017核酸纯度检测方法紫外分光光度法

GB/T37871-2019核酸检测试剂盒质量评价通则

GB/T37872-2019核酸提取纯化试剂盒性能要求

GB/T30989-2014测序用DNA文库构建试剂盒通用技术要求

GB/T37873-2019病原微生物核酸测序数据分析流程

GB/T34797-2017核酸浓度测定荧光染料法

GB/T37874-2019核酸样品中残留酶活性检测方法

GB/T37875-2019微生物核酸污染控制规范

GB/T37876-2019核酸测序数据质量评价指南

GB/T37877-2019临床样本核酸提取物质量要求

检测设备

1.紫外-可见分光光度计：型号UV-Pro-2600，波长范围190-800nm，A260/A280测量精度±0.01

2.荧光定量PCR仪：型号qPCR-Expert-96，温度控制精度±0.1°C，检测通道4-6个

3.超微量核酸分析仪：型号NanoCheck-100，样品体积0.5-2μL，浓度范围2-15000ng/μL

4.电泳系统：型号GelImage-3000，紫外透射波长302nm，图像分辨率1280x1024像素

5.颗粒计数器：型号ParticleScan-200，粒径检测范围0.1-10μm，计数精度±5%

6.微生物快速检测系统：型号MicroFast-50，ATP生物荧光法，检测限1CFU/mL

7.电感耦合等离子体质谱仪：型号ICP-MS-Nexus，元素检测下限0.1ppb，用于金属离子残留

8.pH计：型号pH-Precision-700，测量范围0-14，精度±0.01pH

9.酶标仪：型号PlateReader-480，波长范围400-700nm，读板速度10秒/96孔

10.高速离心机：型号CentriMax-5000，最大转速5000rpm，温度控制4-40°C