可送检的样品类型与对应检测项目
| 样品类型 | 典型应用场景 | 主要检测项目 | 常用方法 / 参考 |
|---|---|---|---|
| 石蜡组织切片(FFPE) | 动物与植物组织基因表达定位、空间分布分析 | mRNA原位杂交、miRNA原位杂交、显色原位杂交、拷贝数变异分析 | 4μm连续切片、蛋白酶K消化(10-20μg/mL)、地高辛或生物素标记探针、NBT/BCIP显色、核固红复染 |
| 冷冻切片 | RNA完整性要求高的表达定位研究 | 全长mRNA原位杂交、荧光原位杂交 | OCT包埋、冷冻切片6-10μm、4%多聚甲醛固定、荧光素标记探针 |
| 细胞爬片与涂片 | 培养细胞基因表达分析、端粒与着丝粒定位 | 细胞荧光原位杂交、间期核信号计数 | 甲醇与冰醋酸(3:1)固定、DAPI复染、荧光探针直接标记 |
| 中期染色体标本 | 染色体数目与结构畸变分析、物理作图 | 基因座特异FISH、多色FISH(M-FISH/SKY 24色)、端粒定位 | 秋水仙素前处理、低渗处理、火干制片、严谨洗脱 |
| 植物根尖与花药压片 | 外源染色体片段检测、种间亲缘基因组区分 | 基因组原位杂交(GISH)、阻断体系优化 | 多聚甲醛固定、纤维素酶与果胶酶混合酶解、DAPI复染 |
| 环境微生物样本 | 活性污泥、生物膜与水体群落空间分布研究 | 16S rRNA靶向FISH、催化信号放大FISH、三维重构分析 | 4%多聚甲醛固定、乙醇序贯脱水、CY3/CY5标记寡核苷酸探针、共聚焦观察 |
| 食品与农业样本 | 发酵体系微生物组成核查、品系特异性序列定位 | 菌种特异性探针杂交、阳性细胞计数 | 荧光标记寡核苷酸探针、明场与荧光双通道判读 |
检测项目
1. mRNA原位杂交:单基因表达定位,检测灵敏度约1-10拷贝/细胞,阳性细胞百分比联合染色强度按0-3分制半定量评分
2. 荧光原位杂交(FISH):基因座特异探针靶标100-500kb,间期核计数不少于100个,红绿信号比值法判定阈值2.0
3. miRNA原位杂交:LNA探针靶标长度18-24nt,经TSA信号放大后检出限可达飞摩尔级
4. 基因组原位杂交(GISH):种间染色体区分,阻断DNA用量为探针的50-100倍
5. 染色体畸变分析:缺失、易位与扩增核型判定,中期分裂相计数20-50个、间期核100-500个
6. 微生物FISH:16S rRNA靶向群落在位识别,检出限约10³细胞/mL
检测范围
1. 动物组织样本:石蜡包埋组织、冷冻组织、组织芯片
2. 植物组织样本:根尖、花药、愈伤组织、叶片原生质体制片
3. 细胞样本:贴壁与悬浮培养细胞爬片、中期染色体标本
4. 环境样本:活性污泥、生物膜、沉积物与水体富集样本
5. 食品与农业样本:发酵菌体、品系特异性序列定位样本
检测方法
1. GB/T 27403-2008 实验室质量控制规范 食品分子生物学检测
2. GB/T 37871-2019 核酸检测试剂盒质量评价技术规范
3. ISO 20395:2019 生物技术 核酸靶序列定量方法性能评价要求
4. GB 19489-2008 实验室 生物安全通用要求
5. GB/T 6682-2016 分析实验室用水规格和试验方法
检测设备
1. 荧光显微镜(Axio Imager Z2):激发光谱365-650nm,物镜10-100倍油镜
2. 共聚焦激光扫描显微镜(LSM 900):z轴步进0.1μm,配备光谱拆分模块
3. 全自动核型扫描系统(Metafer):单轮8片玻片,间期核自动定位与信号捕获
4. 原位杂交仪(ThermoBrite):温控37-95℃,精度±1℃,程序化变性与杂交
5. 石蜡切片机(RM2235):切片厚度0.5-100μm
6. 冷冻切片机(CM1950):切片温度低至-35℃,厚度1-60μm
7. 恒温杂交炉:温度室温至100℃,转速2-20rpm
8. 微量分光光度计(NanoDrop One):取样量1-2μL,波长190-850nm
9. 蒸汽灭菌器:温度105-135℃,容积50-100L
10. 组织脱水机(TP1022):12个试剂工位,程序化脱水与透明