可送检的样品类型与对应检测项目

样品类型 典型应用场景 主要检测项目 常用方法/参考
农田与设施土壤 连作障碍诊断、产区种群普查、抗性品种田间评价 种群密度定量、属级识别、种类鉴定、侵袭种类筛查 贝曼漏斗法或浅盘法分离，显微测计；依据GB/T 29577-2013；采样执行NY/T 1121.1-2006
根系与根围土 果树、薯类、香蕉等作物根腐病因排查与危害分级 根内虫口密度、坏死斑比例、病情指数、种群组成 根组织直接解剖挑取，结合蔗糖离心漂浮法，称重计数
种苗与繁殖材料 产地检疫、调运抽检、组培苗与种薯健康评价 带虫率抽检、侵袭种类筛查、除害处理效果复核 解剖镜检结合分子检测；马铃薯种薯参照GB 7331-2003
栽培基质与有机肥 无土栽培与温室基质安全性评估、投入品准入 活虫检出、虫口密度、种类组成 蔗糖离心漂浮法（比重约1.18），显微镜全皿计数
病组织与水样 根腐复合病因鉴定、灌溉系统带虫评估 根内线虫识别、与腐生线虫区分、活虫比例 显微镜检与DNA条码测序互相印证；近缘种鉴定流程参照GB/T 24830-2009

检测项目

1. 种群密度定量：结果以条/100g风干土或条/10g鲜根计，同时报告活虫比例与龄期组成

2. 形态学种类鉴定：测计体长400μm至900μm、口针长12μm至18μm、V值75%至85%等特征，执行De Man公式测计

3. 分子种类鉴定：扩增28S D2-D3区、内转录间隔区与COI基因并双向测序，序列相似度≥99%判定同种

4. 侵袭种类筛查：穿刺短体线虫、咖啡短体线虫、卢斯短体线虫等重点种类按GB/T 29577-2013执行鉴定

5. 危害程度评估：根系坏死斑面积比例、病情指数0至100、地上部长势与根重损失对应关系分析

检测范围

1. 农田与设施土壤：大田、温室及果园耕作层0cm至30cm混合样与根围土

2. 植物根系样品：马铃薯、玉米、小麦、香蕉、苹果、桃、烟草及花卉根系

3. 种苗与繁殖材料：组培苗、脱毒种薯、球茎、苗木及接穗

4. 栽培基质与有机肥：草炭、椰糠、菇渣、蚓粪及腐熟有机肥

5. 病组织与水样：坏死根段、根腐组织以及灌溉水、退水沉淀物

检测方法

1. GB/T 29577-2013 短体线虫属（侵袭种类）检疫鉴定方法：形态测计与分子鉴定总纲

2. GB/T 24830-2009 香蕉穿孔线虫检疫鉴定方法：短体科近缘种形态测量与DNA条码鉴定参考

3. GB 7331-2003 马铃薯种薯产地检疫规程：薯田土壤与种薯带虫状况田间核查

4. NY/T 1121.1-2006 土壤检测 第1部分：土壤样品的采集、处理和贮存

5. 分子条码鉴定方法：28S D2-D3区与COI基因扩增双向测序，序列相似度≥99%判定同种

检测设备

1. 正置研究级生物显微镜（BX53型）：放大倍数40×至1000×，配微分干涉观察组件与目镜测微尺，形态测计精度0.5μm

2. 体视显微镜（SMZ25型）：变焦比25:1，配冷光源与载物照明，用于根系剖检和活虫挑取

3. 实时荧光定量PCR系统（QuantStudio 5型）：96孔模块，支持探针法与熔解曲线分析，温度均一性±0.25℃

4. 梯度基因扩增仪（T100型）：温度梯度4℃至99℃，用于退火温度优化与常规扩增

5. 高速冷冻离心机（5430R型）：最大相对离心力17000×g，温控范围-10℃至40℃，配套15mL与50mL转子

6. 凝胶成像分析系统（G:BOX型）：紫外365nm与蓝光470nm双光源，支持琼脂糖凝胶条带分析

7. 贝曼漏斗分离装置：漏斗口径150mm至200mm，配60目筛网与低功率加热灯，单装置处理土样100g

8. 浅盘分离装置（Whitehead型）：双层不锈钢筛盘，筛网孔径60目，适合大批量样品批量分离

9. 超微量分光光度计：加样体积1μL至2μL，双链DNA检测范围2ng/μL至15000ng/μL