可送检的样品类型与对应检测项目
| 样品类型 | 典型应用场景 | 主要检测项目 | 常用方法 / 参考 |
|---|---|---|---|
| 固氮菌菌剂（液体、粉剂、颗粒） | 微生物肥料生产放行、产品登记检验、货架期质量跟踪 | 固氮酶活性、全氮增量、有效活菌数、杂菌率、pH、水分、细度 | GB 20287-2006《农用微生物菌剂》、NY 411-2000《固氮菌肥料》、平板菌落计数 |
| 根瘤菌接种剂 | 大豆、苜蓿、豌豆、花生等豆科作物拌种与种子包衣 | 有效活菌数、固氮酶活性、结瘤效力、宿主专一性、杂菌率 | NY 410-2000《根瘤菌肥料》、乙炔还原法结合气相色谱测定、盆栽结瘤验证 |
| 实验室保存菌株 | 新分离菌株功能评价、诱变与基因组编辑株验证、菌种库建档 | nifH基因扩增与测序、乙炔还原活性、15N2固定速率、菌种鉴定 | 聚合酶链式反应扩增nifH片段、同位素示踪培养、16S核糖体RNA基因测序比对 |
| 复合微生物肥料与生物有机肥 | 肥料登记抽样检验、田间示范推广前功能复核 | 有效活菌数、总养分、固氮活性、杂菌率、粪大肠菌群 | NY/T 798-2015《复合微生物肥料》、GB/T 19524.1-2004、GB/T 8572-2010 |
| 根际土壤与水体分离的野生菌株 | 微生物资源调查、功能菌筛选、盐碱地与贫氮生境菌种开发 | 菌株分离纯化、固氮活性初筛、系统发育鉴定、耐盐耐低温特性 | 无氮培养基分离培养、乙炔还原法批量初筛、分子系统发育分析 |
检测项目
1. 固氮酶活性（乙炔还原法）：每毫升培养物每小时生成乙烯5-2000纳摩尔，强固氮菌株可超过3000纳摩尔
2. 全氮增量：无氮培养基接种培养5-7天，全氮增加量每升10-150毫克，空白本底同步扣除
3. 15N2固定速率：15N原子百分超检出限达百万分之一量级，直接表征氮气固定与同化
4. nifH固氮酶还原酶基因：扩增目的片段约360碱基对，阳性结果经测序比对确认
5. 有效活菌数：液体剂型不低于2.0亿每毫升，粉剂不低于2.0亿每克，杂菌率不超过15%
检测范围
1. 自生固氮菌剂：圆褐固氮菌、棕色固氮菌等好氧自生固氮菌制剂
2. 根瘤菌接种剂：慢生根瘤菌、中华根瘤菌、豌豆根瘤菌等豆科专用接种剂
3. 联合固氮菌株：固氮螺菌、假单胞菌、粪产碱菌等根际联合固氮菌
4. 固氮芽孢杆菌：多粘类芽孢杆菌、萎缩芽孢杆菌等产芽孢功能菌株
5. 固氮蓝细菌：鱼腥藻、念珠藻等丝状固氮蓝藻及红萍共生蓝藻
检测方法
1. GB 20287-2006 农用微生物菌剂（有效活菌数、杂菌率及产品判定）
2. NY 411-2000 固氮菌肥料（固氮菌菌剂产品指标与试验方法）
3. GB/T 8572-2010 复混肥料中总氮含量的测定 蒸馏后滴定法（全氮增量法测定固氮量）
4. GB/T 19524.1-2004 肥料中粪大肠菌群的测定（菌剂卫生安全控制）
5. NY/T 798-2015 复合微生物肥料（复合菌肥有效活菌数与养分指标）
6. 乙炔还原活性测定法（气相色谱法，供试菌株密闭培养后测定乙烯生成速率，用于固氮酶活性定量）
检测设备
1. 气相色谱仪（GC-2030型）：配氢火焰离子化检测器，乙烯最低检测浓度每毫升气相0.01纳摩尔
2. 同位素比率质谱仪（253 Plus型）：与元素分析仪联用，氮同位素比值测定精度优于十万分之一
3. 全自动凯氏定氮仪（K-375型）：蒸馏滴定一体化，单次测定范围0.1-200毫克氮
4. 紫外可见分光光度计（UV-1800型）：波长190-1100纳米，用于菌体浓度与比浊监测
5. 厌氧培养工作站（YQX-II型）：舱内氧气体积分数低于百分之一，满足固氮酶低氧操作
6. 恒温摇床（ZWY-2102C型）：转速40-300转每分，控温精度正负0.5摄氏度
7. 聚合酶链式反应仪（T100型）：96孔样品台，最大升温速率每秒3摄氏度
8. 凝胶成像分析系统（1600型）：用于nifH扩增产物电泳条带判读与记录
9. 超净工作台（SW-CJ-2F型）：垂直层流洁净操作，尘埃粒子达百级洁净度
10. 光照培养箱（PGX系列）：温度15-45摄氏度，光照强度0-300微摩尔每平方米每秒，满足蓝藻培养