可送检的样品类型与对应检测项目
| 样品类型 | 典型应用场景 | 主要检测项目 | 常用方法 / 参考 |
|---|---|---|---|
| 植株虫体样品（成虫/若虫） | 设施蔬菜、花卉种苗、果树蓟马种类普查与防治决策 | COI基因条形码种类鉴定、内转录间隔区近缘种区分、种群遗传多样性分析 | 基因组DNA提取、PCR扩增、Sanger测序、序列比对建树 |
| 检疫截获蓟马标本 | 进境花卉种苗、果蔬产品口岸检疫与调运复检 | 西花蓟马等检疫性种类特异性PCR、实时荧光定量PCR确证 | GB/T 28980-2012、EPPO PM 7/4诊断协议 |
| 蓟马带毒检测样品 | 番茄、辣椒、花卉病毒病传播媒介评估与预警 | 番茄斑萎病毒等病毒带毒个体检测、种群带毒率统计 | 反转录PCR、实时荧光RT-PCR |
| 抗药性筛查样品 | 设施农业杀虫剂轮换用药与抗性治理指导 | 乙酰胆碱酯酶等靶标基因点突变分型、代谢酶基因表达量分析 | 实时荧光定量PCR基因分型与相对定量 |
| 土壤基质蓟马蛹 | 设施土壤虫口基数调查、防治效果评估 | 蛹体虫种分子鉴定、虫口密度评估 | 土壤筛洗富集、单蛹DNA提取与扩增 |
检测项目
1. COI基因条形码鉴定：标准片段658bp，种内遗传距离一般小于2%，种间通常大于3%
2. 内转录间隔区测序：片段长度约300至600bp，用于近缘种与隐存种复合体区分
3. 检疫性蓟马特异性PCR：针对西花蓟马等种类设计特异性引物，单头成虫DNA即可完成扩增
4. 蓟马带毒率检测：番茄斑萎病毒RT-PCR法，检测灵敏度可达皮克级核酸模板
5. 抗药性基因突变筛查：靶标基因点突变分型，低频突变检出下限约5%
检测范围
1. 西花蓟马：进境植物检疫性有害生物，设施蔬菜花卉重要害虫
2. 烟蓟马：葱蒜类蔬菜与棉花重要害虫
3. 花蓟马：花卉、豆科与茄科作物常见种类
4. 棕榈蓟马：瓜类与茄子等设施作物优势种群
5. 稻蓟马：水稻秧苗期主要害虫
6. 茶黄蓟马：茶树与葡萄嫩梢危害种类
检测方法
1. GB/T 28980-2012 西花蓟马检疫鉴定方法：形态学特征结合分子鉴定
2. EPPO PM 7/4 西花蓟马诊断协议：国际区域植保组织标准诊断流程
3. COI基因DNA条形码法：通用引物LCO1490与HCO2198扩增标准片段后测序比对
4. 内转录间隔区测序法：核糖体内转录间隔区扩增，补充区分形态近似种类
5. 实时荧光定量PCR法：TaqMan水解探针特异性检测检疫性蓟马
6. RT-PCR法：反转录聚合酶链式反应检测虫体携带的番茄斑萎病毒核酸
检测设备
1. 梯度PCR仪：温控范围4至99℃，最大升降温速率每秒4℃
2. 实时荧光定量PCR仪：五通道荧光检测，温度均一性±0.2℃
3. 高速组织研磨仪：振荡频率每秒30次，兼容微量离心管批量研磨虫体
4. 琼脂糖凝胶电泳系统：电压50至300伏，配水平电泳槽与制胶模具
5. 凝胶成像分析系统：蓝光与紫外双光源，分辨率大于500万像素
6. 超微量分光光度计：核酸检测范围2至15000纳克每微升，取样体积1微升
7. 体视显微镜：变焦倍率0.67至4.5，工作距离大于100毫米
8. 生物显微镜：放大倍数40至1000倍，用于虫体玻片形态核对
9. 高速冷冻离心机：最大转速每分钟15000转，温控范围零下10至40℃
10. 超低温保存箱：箱内温度零下86℃，用于虫体标本与核酸样本保存